小体鲟ar基因克隆_序列分析及其组织mrna表达

《小体鲟ar基因克隆_序列分析及其组织mrna表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中国水产科学2014年11月,21(6):11461153JournalofFisherySciencesofChina研究论文DOI:10.3724/SP.J.1118.2014.01146小体鲟AR基因克隆、序列分析及其组织mRNA表达1,2113331余晶,董晓丽,张颖,刘晓勇,潘鹏,买丽坎,孙大江1.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,黑龙江哈尔滨150070;2.上海海洋大学水产与生命学院,上海201306;3.中国水产研究院鲟鱼繁育工程中心,北京100039摘要:采用RT-PCR和RA

2、CE技术,克隆了小体鲟(Acipenserruthenus)雄激素受体(AR)基因cDNA全长序列,应用real-timeqPCR法对雌、雄个体不同组织中ARmRNA的表达进行检测。序列分析表明,AR基因cDNA全长为2953bp,包括5′端68bp的非编码区(untranslationregion,UTR),2528bp的开放阅读框ORF(openreadingframe)和3′端327bp的非编码区(不包括ployA的尾巴)。AR前体蛋白由843个氨基酸组成,理论分子质量为94.24kD。同源比

3、较结果表明,小体鲟AR氨基酸序列与其他鱼类的AR氨基酸序列同源性较高,与杂交鲟(A.ruthenus×Husohuso)、西伯利亚鲟(A.baerii)、虹鳟(Oncorhynchusmykiss)和日本鳗鲡(Anguillajaponica)的雄激素受体同源性分别为99%、98%、83%和83%。real-timeqPCR分析小体鲟雌雄个体不同组织中的表达结果显示,AR基因在雌雄个体中相对表达基本相同,都是在性腺、肌肉和肾中高量表达,而在其他组织中少量表达。AR基因在小体鲟体内广泛表达,表明该基因

4、可能对其生长和繁殖有重要作用。关键词:小体鲟;雄激素受体;基因克隆;序列分析;组织表达中图分类号:S917文献标志码:A文章编号:10058737(2014)06114608鲟(Acipenseriformes)是世界现有鱼类中体型培育优质的雌性个体,而鲟性成熟时间长,成熟大、寿命长的古老鱼类,被称为“活化石”,鲟类不个体无副性征且卵巢发育易受环境影响。有关研仅具有重要的食用、营养、滋补、保健、药用、究发现,在鲟的养殖过程中其性腺出现分化异常观赏等经济价值,而且还具有重要的科学研究价和发育停

5、滞等现象,并且这一现象在雌性中发生比[1][4]值。小体鲟(Acipenserruthenus)隶属于鲟科率更高。因此,掌握鲟类性腺发育规律及调控技(Acipenseridae),鲟亚科(Acipenserinae),鲟属术成为鲟鱼养殖业的当务之急。(Acipenser),分为洄游和定栖两种类型,主要分在小体鲟性腺分化和发育等阶段起重要作用[6–10]布于里海、黑海、亚速海、地中海、欧洲国家和的是雄激素。雄激素是一种类固醇激素,在芳[2]中国的新疆地区。小体鲟个体小、生长慢、性香化酶的作用下转化为雌

6、激素,被认为是所有雌[5]成熟早,雌鱼怀卵量在0.2万~7万粒/kg,是目前激素的前体物质。在虹鳟(Onchorynchusmykiss)鲟养殖业中良好的杂交亲本,适合大水面养殖,性别分化的研究中发现,雄激素睾酮能够促进未[3][11]具有良好的养殖前景。同时小体鲟也是中国生成熟虹鳟的性腺发育。而雄激素的这些作用是产鱼子酱的重要养殖种类之一。生产鱼子酱需要通过雄激素受体(androgenreceptor,AR)介导发挥收稿日期:2013-12-09;修订日期:2014-02-27.基金项目:国家公益

7、性行业(农业)科研专项(201003055);国家重大科技成果转化项目(ZD-2012-345);国家科技支撑计划项目(2012BAD25B10).作者简介:余晶(1987−),女,硕士研究生,研究方向为鱼类繁殖生理.E-mail:honganyujing@126.com通信作者:孙大江,研究员.E-mail:sundajiang0451@163.com第6期余晶等:小体鲟AR基因克隆、序列分析及其组织mRNA表达1147[12]的。因此,AR在鱼类的生长发育过程中有非常性和雄性相同组织中的表达差异

8、,为有关小体鲟重要的作用。AR是核受体超家族一员,该受体家生长发育与繁殖的进一步研究的奠定基础。族基因具有相似的分子结构,都由3个主要功能1材料与方法区域组成:1)高度变异的反转录激活区(transact-ivationdomain,TAD);2)高度保守的DNA结合1.1实验鱼区(DNA-bindingdomain,DBD);3)中度保守的配实验用的小体鲟均采自中国水产科学研究院体结合区域(ligandbindingdomain,LBD)[13–15]。鱼鲟繁育工程