人CCL21基因克隆及其序列分析

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1、国睚

2、雷■盈同2011年10月第9卷第29期·论著·201人CCL21基因克隆及其序列分析刘长珐崔凯李胜(1I临沂大学商学院，山东临沂276000；2山东省肿瘤防治研究院，山东济南250117)【摘要】目的克隆人次级淋巴组织趋化因子CCL21基因。方法设计合成克隆人CCL21基因的引物，从人淋巴结组织中提取总RNA，利用RT-PCR技术扩增得到人CCL21基因，克隆到pEASY-T1simple载体中，PCR、酶切鉴定及DNA序列分析。结果成功克隆出人CCL21基因。结论序列分析显示克隆出的目的基因与GenBank中序列完全一致。【关键词】次级淋

3、巴组织趋化因子；基因；序列分析中图分类号：R596文献标识码：B文章编号：1671-8194(2011)29-0201—03CloningandSequenceAnalysisofHumanCCL21LIUChang-yingi．CUIKai2LiSheng2,flSchoolofBusiness,LinyiUnivesity,Linyi276000,China,"2ShandongCancerHospital,Jinan250117,China)IAbstract】ObjectiveToclonehumansecondarylymphoidti

4、ssuechemokine(heeL21)．MethodTwopairsofprimersweresynthesizedaccordingtothehCCL21genereportedonGenBank．ThetotalRNAwasextractedfromhumanHumanlymphnodetissue，andthenthehCCL21genewasamplifiedbyRT-PCRtechnologyandclonedimopEASY-TIsimplevector．PCR，restrictionanalysisandsequenceanal

5、ysisshowedthatthegeneclonedwasthesameasthereportedhCCL21．ResultsThehumanCCL21genewasclonedsuccessfully．ConclusionSequenceanalysisshowedthattheclonedtargetgenesequenceisfullyconsistentwiththehCCL21genereportedonGenBank．IKeywords】Secondarylymphoidtissuechemokine；Gene；Sequencean

6、alysis次级淋巴组织趋化因子(secondarylymphoidtissuechemokine，精密天平；AB19700PCR仪；WH一1微型漩涡混合仪；移液器2／,tl、SLC)属于CC亚族趋化因子，~IJCCL21，是I~tNagria[IJ在人基因表达10l、20l、100I．t1、200l、1000l；·20~C低温冰箱；DYY-JJI[型序列标签(expressedsequencetag，EST)数据库中克隆出的趋化因电泳装置等。子，CCL21的基因定位于9p13，其eDNA序列包括847个碱基，由4个l_3主要试剂外显子和3个内含

7、子组成，其分子量约为14KD，由134个氨基酸残基Trizol试剂购lnvitrogen公司；逆转录酶、TaqDNA聚合酶、Xba组成，其@23个氨基酸残基为信号肽序列，111个氨基酸的成熟肽含I、NotI内切酶购于大连宝生物工程有限公司(TAKARA产品)；有4个半胱氨酸残基，与其他人类CC型趋化因子有21％-33％的同源T4DNA连接酶、DNAmarker、质粒DNA4~提试剂盒购于北京天根生性，但有其独特的约3O个氨基酸组成的羧基末端延伸，该延伸内包含物技术公司；胶回收试剂盒均系MBIfermenters公司产品；酵母提取2个半胱氨酸残基。

8、CCL21主要存在于外周次级淋巴组织，如脾、淋物、蛋白胨和琼脂糖均购于英国OXOID公司。巴结等部位，它具有较强的趋化作用，特别是对树突状细胞，T细胞1．4引物设计及合成与自然杀伤细胞，能使其聚集到外周淋巴组织或器官，而外周淋巴组CCL21引物设计：应用primer5．0软件设计引物，由上海生物工程织是免疫应答发生的初始部位。Campebell等研究证实：在流动状态有限公司合成。下CCL21能诱导循环T细胞快速粘附到高内皮小静脉(highendothelial上游引物：5’一Gctctagaatggctcagtcactggctct一3’}下游引物

9、venules，HEV)上，参与淋巴细胞和树突状细胞(dendriticcell，5’一ATATgcggcc一3’。DCs)的归巢和迁移