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1、第32卷第1期作 物 学 报Vol132,No112006年1月 46～50页ACTAAGRONOMICASINICApp146-50Jan1,2006甘蓝MLPK基因的克隆与序列分析11,2,32,X赵永斌 朱利泉 王小佳(12西南大学农学与生命科学学院;重庆市蔬菜学重点实验室,重庆400716)摘 要:采用PCR、RT2PCR以及其他分子生物学方法,以甘蓝基因组DNA和柱头cDNA为模板对MLPK基因进行扩增克隆,首次得到长度分别为1615bp和1294bp的基因片段。序列分析表明,甘蓝MLPK与芜菁MLPK的cDNA序列相似性达98%,前者的内含子数为4个,比
2、后者少了3个;同时,在前者内含子中发现了不同于典型的GU2AG规则的新的序列,即第3、4个内含子5′端碱基是TA、CG,3′端碱基为CAGG、GT,推测甘蓝MLPK的mRNA具有独特的剪切机制。这为甘蓝自交不亲和分子机理研究提供了新内容。关键词:自交不亲和;信号传导;MLPK基因;内含子;剪切中图分类号:Q51CloningandSequencesAnalysisofMLocusProteinKinaseGenefromBrassicaoleracea11,2,32,3ZHAOYong2Bin,ZHULi2QuanandWANGXiao2Jia(CollegeofA
3、gronomyandLifeScience,SouthwestUniversity,ChongqingKeyLaboratoryofOlericulture,Chongqing400716,China)Abstract:TheDNAandcDNAfragmentsofMlocusencodingproteinkinasewereinitiallyamplifiedfromgenomicDNAandstigmacDNAinBrassicaoleraceabyusingPCR,RT2PCRandothermolecularmethods.Theirlengthswere
4、1615bpand1294bprespectively.Forthefirsttime,sequenceanalysisindicatedthattherewas98%identityofMLPKcDNAbetweenBrassicaoleraceaandBrassicarapa.InBrassicaoleracea,theMLPKgenecontainedfourintrons,whichwerethreeintronslessthanthoseinBrassicarapa.Moreover,intwoendsofintronsofMLPKgenefromBras
5、sicaoleracea,therewerenewbasesequenceswhichdidn’tcomplywithtypicalGU2AGrule:TAandCGexistedinthe5′endofthethirdandthefourthintronofMLPKgene;CAGGandGTwerefoundrespectivelyinthe3′endofthesequences.Sowespeculatedthatthesenewbasesequencesmayhaverelationtoanewspliceprocess.Theseresultsprovid
6、edsomenewinsightintothemolecularmechanismofself2incompatibilityinBrassicaoleracea.Keywords:Self2incompatibility;Signaltransduction;MLPKgene;Intron;Splice 芸薹属植物中普遍存在着一个以S2locus基因的突变体的研究中发现,自交不亲和信号传导途径介导的自交不亲和(Self2Incompatibility,SI)信号传导还受M2locus基因的调控,该基因同S2locus基因类途径,在S多基因家族中,包含SLG(S2
7、locus似,但独立于后者,只在柱头中表达,编码一个膜锚[1]glycoprotein)、雌性决定基因SRK(Slocusreceptor定磷酸化蛋白———M位点蛋白激酶(Mlocusprotein[2][6]kinase)及雄性决定基因SCR(S2locuscystein2richkinase,MLPK)。目前对MLPK的研究,只限于芜[3]protein)PSP11(S2locusprotein11),当具有相同单倍菁中,鉴于此种情况,还不能明确MLPK在SI信号型时,来自花粉中的半胱氨酸富含蛋白SCRPSP11与传导途径中的作用,因此还有必要对其他芸薹属植
