甘蓝型油菜线粒体未知基因的克隆与功能分析

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1、‘分类号０９４密级ＵＤＣ论文编号敞化也一ｆ硕±学位论文论文题目：甘蓝型油莱线粒体未知基因的克隆与功能分析研究生：范世航■导师；．杨之帆教授华韩研究员．专业：植物学；研究方向：油菓功能基因组学．２０１５年５月：１０５１２分类号：Ｑ９４学校代号学号；２０１２１１１１０７０００８０２湖北大学硕±学位论文甘蓝型油菜线粒体未知基因的克隆与功能分析作者姓名：范世航指导教师姓名、职称：杨之帆教授华讳研究员申请学位类别：植物学；理学硕±学科专业名称研究方向

2、：油菜功能基因姐学论文提交日期；么年＞月知日论文答辩日期：＞解巧务日学位授予单位：湖北大学学位授予日期：年月曰答辩委员会主席；主為ＡＣｌｏｎｉａｎｄＦｕｎｃ枯ｏｎａｌＡｊａａｌｓｉｓｏｆｎｋｏｗｎｎｇｙＵＭｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａＧｅｎｅｓｉｎＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ．ＡＴｈｅｓｉｓＳｕｂｍｉｔｔｅｄｆｏｒｔｈｅＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒＣａｎｄｉｄａｔｅ：Ｆａｎ凯化ａｎｇＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＹａｎｇＺｈｉｆａｎＰｒｏｆ．ＨｕａＷｅｉＨｕｂｅｉ

3、ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＷｕｈａｎ，Ｃｈｉｎａ学位论文使用授权书、本论文作者完全了解学校关于保存使用学位论文的管理办法及规定，巧学校有权保留并向国家有关巧口或机构送交论文的复印件和电子版．本人完全同意《，允许论文被查阅和借阀中国博壬＂＂》、《中国》化乂下简称章程学位论文全文数据库出版章程优秀硕±学位论文全文数据库出版章程，见ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ），愿意将本人的学位沦文提交中国学术期刊（光盘版）电子杂志杜在《中国博壬》、学位论文全文数据库、《中国优秀硕±学位论文全文数据库》中全文发表和Ｗ电子网络及其他数字媒体形式公开出

4、版，并同意编入州ＫＩ《中国知识资源总库》，在《中国博硕±学位论文评价数据＂＂》，同意按章程规定享受相关权益，库中使用和在互联网上传播（请作者直接与杂志社联系联系人：栗老师：通讯地址：；电话邮编：一本授权书签署。式兰份，交湖北大学学位评定委员会办公室＾：学位论文作者签名：导师签名／月Ｖ曰）化心年＞：年＾月＞０湖北大学研究生学位论文作者信息论文题目甘蓝型油菜线粒体未知基因的克隆与功能分析姓名范世化学号２０口１１１１０７０００８０２答辩日期２０１５年５月３０曰论文级别博：ｔ□硕击院生命科学

5、学院专±植物学＾Ｅｍａ联系电话作者ｉｌ＿作者通信地址含邮编：（）奋注：注：本论文如需保密，保密级别是，解密时间是＿＿年＿＿月。條密学位论文在解密后适用于本授权书）甘蓝型油菜线粒体未知基因的克隆与功能分析摘要线粒体是植物细胞内具有半自主性功能的细胞器，具有自身的ＤＮＡ和蛋白质合成体系，是植物的能量供给单位，直接参与脂肪酸的分解代谢，是细胞内将有机物氧化产生的能量转化为ＡＴＰ（ＡｄｅｎｏｓｉｎｅＴｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ）的主要场所，而ＡＴＰ又是植株进行其他一切生理生化反应的基础。研究线粒

6、体基因的功能对于解析生物学过程、揭示线粒体基因参与的代谢通路和作物改良研究具有重大的探索前景。目前甘蓝型油菜的线粒体基因组测序工作已经完成，发现其中含有大量功能未知的开放阅读框饼？Ｆ（ＯｐｅｎＲｅａｄｉｎｇＦｒａｍｅ），对于线粒体未知基因的研究还有待开展，其基因功能的确定对于研究油菜诸多重要农艺性状具有千分重要的现实意义。针对于甘蓝型油菜线粒体基因组中未知的开放阅读框，本课题做了Ｗ下研究：１．通过对两种胞质类型（，〇／型和》巧；型）的甘蓝型油菜线粒体基因组测序比对，筛？５选出序列特异和序列差异开放阅读框共计１４个：饼？／

7、７八、饼？／７的、饼Ｗ／２２、ＯＲＦ１２３、ＯＲＦ１３２、ＯＲＦ１８８、ＯＲＦ２８６、ＯＲＦ２９３、ＯＲＦ２２２、ＯＲＦ２２４、ＯＲＦ２６１、０５ＯＲＦ３２２。ＯＲＦ２６５、ＯＲＦ３、２．克隆了上１４个甘藍型油菜线粒体功能未知基因，同时为了将目的基因表达的蛋，白定位到线粒体，通过融合ＰＣＲ在其５１＾添加烟草基因户２的线粒体转运狀７７１ｘ（ＴｒａｎｓｉｔＰｅｔｉｉｄｅ）３６Ｈｓ，ｐ，末端添加标签（六组氨酸）构成融合基因并重组到－－－饼３站ａｒｅａｔｅ１．ｖＴＴ．；咒ｐＥｌｙＧ００，最终获得植物表达载体５站饼？仍／３、３５

8、ＳＴＰ－ＯＲＦ１２２－－－：：＞３５Ｓ：：ＴＰＯＲＦ１２３、３５Ｓ：：ＴＰＯＲＦＨ２、３５