甘蓝型油菜矮杆基因bnrgads的克隆和功能分析

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1、华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文是否保密否如需保密，解密时间年月日独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定．与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意．研究蝴：到怨帆汐／，9年乡月罗日学位论文使用授权书本人完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即

2、学生必须按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电子版，并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容，同时本人保留在其他媒体发表论文的权力．注：保密学位论文(即涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密的论文)在解密后适用于本授权书．学位敝作者签名：割超导师张壕、趁签名日期：．zofo牟-、乡月9日签名日期如p年彳月，6日。注；请将本表直接装订在学位论文的扉页和目录之间一———

3、——————————————————————————————————————————一——一——甘蓝型油菜矮杆基因Bnrga．ds的克隆和功能分析目录摘；要．IAbstract．．．III缩略语表VI第一章文献综述．11．1禾本科作物矮杆突变体的遗传研究和应用11．1．1水稻矮杆突变体的遗传研究和应用l1．1．2小麦矮杆突变体的遗传研究和应用21．2油菜矮杆突变体遗传研究现状．31．3高等植物矮杆性状的机理研究51．3．1赤霉素与植物矮化51．3．1．1GA生物合成途径与植物矮化．51．3．1。2GA信号转导途径与植物矮化71．3．

4、2油菜素内酯和植物矮化121．3．2．1BR生物合成和植物矮化．．131．3．2．2BR信号转导途径和植物矮化．．151．3．3生长素与植物矮化．．151．3．3．1生长素生物合成和植物矮化151．3．3．2束缚型生长素的形成和植物矮化161．33．3生长素的极性运输与植物矮化161．3．3．4生长素信号转导途径和植物矮化．171．4本研究的目的和意义．．17第二章材料和方法一192．1植物材料．192．2矮杆基因的定位192．2．1定位群体的构建192．2．2基因组DNA的提取．．192．2．3BSA法和SSR分析．．202．2．

5、4PAGE凝胶制备和电泳检测．．21华中农业大学2010届博士学位论文2．2．5SCAR标记SCM07的检测。2l2．2．6数据分析222．3候选基因的分析．222．3．1候选基因转录水平的分析222．3．1．1总RNA的提取．．222．3．1．2cDNA的合成．．222．3．1．3半定量RT-PCR。232．3．2候选基因编码序列比对232．3．2．1编码序列的扩增．232．3．2．2DNA片段的回收、克隆．232．3．2．3感受态细胞的电击转化242．3．2．4质粒的提取、检测和测序242．3．2．5甘蓝型油菜不同品种BnRGA

6、编码序列的测定．．252．4候选基因的转化验证．．252．4．1转化载体的构建252．4．2拟南芥的遗传转化和阳性植株筛选．272．4．3转基因拟南芥的筛选和表型观察272．5定点突变．．272．6酵母双杂交实验．282．6．1酵母双杂交的载体构建282．6．2酿酒酵母感受态细胞的制备292．6．3酵母菌的转化．302．7亚细胞定位．．312．7．1转化载体的构建312．7．2亚细胞定位观察3l2．8甘蓝型油菜的遗传转化．312．8．1甘蓝型油菜的转化方法3l2．8．2阳性植株的PCR检测．322．8．3阳性植株花器官的GUS染色．

7、32甘蓝型油菜矮杆基因Bnrga．ds的克隆和功能分析第三章结果和分析333．1突变体扛，矮杆性状的遗传分析333．2腮J基因的分子标记定位．．343．2．1SSR标记的筛选343．2．2SCM07的检测．．363．2．3腮J连锁图谱的构建．．373．3BnRGA和Bnrga．ds转录水平的比较383．4BnRGA和Bnrga·ds的序列比对383．4．1BnRGA和Bnrga．ds的DNA序列比对383．4．2BnRGA和Bnrga-ds氨基酸序列比对．413．5Bnrga．ds转化野生型拟南芥．．433．5．1转化载体的获得．．

8、443．5．2Bnrga．cls转化对野生型拟南芥的影响453．6Atrga—cls转化野生型拟南芥463．7VHYNP模体中Pro突变对Bnrga-ds与GIDl相互作用的影响483．8BnRGA和Bnrga．ds的亚细胞定位503