不同耐盐棉花品种细胞结构、mRNA差异表达及其BADH基因的序列分析

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1、山东农业大学硕士学位论文不同耐盐棉花品种细胞结构、mRNA差异表达及其BADH基因的序列分析姓名：李玉全申请学位级别：硕士专业：作物遗传育种指导教师：沈法富2003.6.16y关于学位论文原创性和使用授权的声明‘南毛≥S萼本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取得的成果。对在论文研究期间绘予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体，均在文中疆确说明。本声明的法律责任由本人承担。本人完全了解函东农韭大学有关傈窝釉使焉学德论文的规定，同激学校保留和按要求向阁家有关部门或机构送交论文纸蒺本和电予版，兔诲论文被

2、凑阂积借阕。本人授权滋东农盈大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其健复制手段保存论文粕汇编本学位论文。，保密论文在解密后应遵守此规定。论文作者签名：考童、室导廖签名：：移砍：鼋日期：a鲫；，∥．，#出东农鼗太学硬士学垃论文摘要本实验以耐盐性不同的棉花鼎种(系)为材料，利用显微制片技术和逛溶按零，分爨不爨浓度盐耱追条磐下，藜簸帮薤敏感攘筏藩秘(系)豹叶片细胞结构和核背酸降解情况的差异；利用DD—PCR技术，分析盐胁遍条件下耐盐和盐敏感品种(系)mRNA的差异表达；将PCR技术

3、和DNA序列分孝厅技术相结合，探讨耐盐性不同的棉花品釉(系)BADH基豳序列及其所编码蕊氯基酸序残瓣差异。国E褥魏下结栗：1．通过盐胁迫条件下的细胞结构观察，发现并找到了不同品种(系)对盐胁迫的反应关系。不管是耐盐品种枝棉3号，还是盐敏感品种鲁棉6号，它键在羝浓度(O．1％NaCl)楚黪遭下璃求表现出细溅结稳异常。醚盐浓波豹增高，耐簸性不同的菇种(系)表现不阉。中浓度(0．2％NaCl)和高浓度(0．5％NaCI)盐胁迫时，韧皮部受损早于木质部，高耐盐性品种枝桶3号与盐敏感品种鲁棉6号相比，韧皮部和本质部受损害的程度

4、低；势萎涎者魏耘疫部秘本蒺部受摸鬻豹程度都穗簸骆遥浓麦豹壤斋羹嚣热羹。2．盐胁迫12h和24h时的棉叶总DNA电泳分析表明，NaCI盐胁迫S}起了棉花的细胞程序性死亡。利用总DNA降解程度表现的细胞程序死亡表明：较低浓疫

5、号和9101l的mRNA，反转浆为cDNA后进行羞髀照示分析。实验利用引物60个，共扩增出432条带，其中OPD05和OPFII两个引物寒扩增出侄侮片断，占怂萼

6、物兹3％；窍52个弓

7、物扩增续聚表现一致，蠢憨弓l物秘87％；勇终6令弓l物共扩耩滋9条差雾赘，占总gI物的10％，由于这些差舜片段是在盐胁迫下特异表达的，因此它们可能与耐盐性稠必，但仍需进～步证明。4．及DNA痔列数据瘴孛羧索舞擅魏BADH蕊嚣靛菝蓉黢凄藏农萁编弼的氨熬黻序列，利用分予生物学软件DNAsis和blast等比较序列间的同源性，找出其保守J葶列

8、，然后根据保守序列分别设计3’和5’端引物，在不同耐盐棉花品种细胞结构、mRNA差异表达及其BADH基因的序列分析供试材料中进行PCR扩增，找到了特异片断。但不同材料间扩增结果存在差异，其中鲁棉研15仅扩增出一条特异片断，9101l和91015扩增出三条特异片段，枝棉3号和鲁棉6号扩增出两条特异片段。取枝棉3号和鲁棉6号的介于1000bp～2000bp的特异片断进行序列测定并分析，结果表明，两者之间同源性高达97％，因而它们为同一基因片段，该序列共包含2个外显子和1个内含子，编码55个氨基酸。Blast分析表明：特异

9、片断与其他植物的BADH基因存在较高的同源性，且外显子部分高度保守，同时也存在发生变异的活跃区域；由核苷酸序列推断出其可能编码的氨基酸序列，发现其也与其他植物的BADH序列有较高的同源性。因此，我们扩增出的特异片断确为棉花的BADH基因片段，但是存在BADH基因的材料／并不一定表现高耐盐性，因此认为BADH基因并非棉花的耐盐主效基因：f关键词：棉花盐胁迫PCDmRNA差异显示BADHTheanalysisofcellarchitecture，mRNAdifferentialdisplayandBADHsequence

10、sofdifferentsalt-tolerantvarietiesincottonLiYuquan，(CollegeofAgronomy，ShandongAgriculturalUmversiV，Taian，Shandong，271018)ABSTRACTFordifferentsalt-tolerantvarwties--ZHM3，UⅥ6，