nkx2.5tbx5gata4等基因在鸡、鹌鹑及其属间杂交种胚胎心脏发育过程中的表达研究

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1、分类号：密级：公开学号：2009108006单位代码：10759石河子大学硕士学位论文【Nkx2.5/TBX5/GATA4等基因在鸡、鹌鹑及其属间杂交种胚胎心脏发育过程中的表达研究学位申请人陈丹盈指导教师赵宗胜教授申请学位门类级别农学硕士学科、专业名称动物遗传育种与繁殖研究方向动物遗传育种所在学院动物科技学院中国·新疆·石河子2012年6月2ExpressionstudiesofNkx2.5/TBX5/GATA4andotherrelevantgeneinchickens,quail,andtheirintergenerichybrids'embryonicheart

2、developmentprocessADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsFortheDegreeofMasterofAgricultureByChenDan-Ying(AnimalGeneticsandBreeding)DissertationSupervisor:Prof.ZhaoZong-shengJune,2012ShihezixinjiangChina3学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据

3、我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名：时间：年月日学位论文版权授权书本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日2摘要鸡与鹌鹑的远缘杂交

4、存在着一定程度的不亲和性，其杂交禽胚胎早期大量死亡，死亡原因到目前为止仍未得到很好地解释。前人从时间、性分化上及细胞凋亡对杂交种胚胎早期死亡的原因进行了分析。本实验进行鸡与鹌鹑体外受精后,采集3-7天的鸡、鹌鹑及杂交禽的胚胎，进行解剖镜下形态学观察，并对其心脏制作石蜡切片进行组织学观察，同时通过实时定量RT-PCR对心脏发育相关的Nkx2-5,TBX5,GATA4，NPPA基因表达规律进行研究，深入探讨鸡与鹌鹑属间杂交种早期胚胎死亡原因与心脏分化发育的关系,结果表明：（1）鸡、鹌鹑与其杂交种在形态学上的观察显示鸡的发育比鹌鹑的迟缓，这与它们的孵化周期相符，而杂交禽发育

5、缓慢，各种生理状态比较微弱，这可能是属间杂交所引起的，由此可见，杂交禽早期胚胎死亡在其发育过程中的生理状态，器官功能方面都是有所体现的。（2）鸡、鹌鹑与其属间杂交种胚胎心脏组织学上观察到，鸡与鹌鹑均在第七天时心脏的构造基本完成。而杂交禽在第七天时腔室分化不明显，房室隔，室间隔还未形成，与亲本鸡、鹌鹑相比心脏发育迟缓，因此推测，杂交禽胚胎心脏有可能发育过于迟缓或者畸形发育不能及时行使心脏的功能导致不能为其他器官的正常发育提供营养物质，因而导致杂交禽胚胎早期死亡。（3）Nkx2-5,TBX5,GATA4三个心脏发育相关转录因子与下游基因NPPA的表达量，在鸡与鹌鹑的胚胎心

6、脏发育中较为一致，但在杂交禽中TBX5,GATA4，NPPA的表达与亲本相比出现异常，而Nkx2-5基因的表达与亲本相比差异不显著（P>0.05），GATA4基因在杂交禽的心脏发育过程中，从时间和表达量上发生紊乱，有可能导致胚胎心脏发育缺陷甚至导致死亡。GATA4基因的下游基因Nkx2-5的表达量并未受到大的影响，由此可见，多种顺式作用元件在不同的空间与时间调控着Nkx2-5基因的表达，使其在胚胎发育过程中发挥着复杂的作用。（4）在同一日龄内，杂交禽胚胎心脏的TBX-5基因表达量与鸡、鹌鹑胚胎心脏的TBX-5基因表达量差异显著（P<0.05）。这种远高于亲本的表达量，

7、会引起心脏的发育畸形，进而导致死亡。杂交禽NPPA基因与亲本相比表达提前，且同一日龄内，杂交禽NPPA基因表达量与鸡、鹌鹑NPPA基因表达量差异显著。由此表明，杂交禽胚胎心脏NPPA基因表达从时间与量上的异常可能导致早期胚胎死亡，而原因有可能是杂交禽NPPA基因错误表达，也有可能是其上游基因的错误调控引起的。关键词：鸡；鹌鹑；杂交禽；心脏发育相关因子；实时荧光定量PCRIAbstractThereisacertaindegreeofincompatibilityinthedistanthybridizationofchickenandquail,le