鸡anxa2基因在卵泡发育中的表达及调控研究

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3、；、、為／曲阜师巧大学硏究生学位论文原创性说明＂＇＂＂（根据学位论文类型相应地在口划Ｖ）＾／本人郑重声明：此处所提交的博±口／硕±巧论文《鸡ＡＮＸＡ２暮因在巧泡发育中的表及调控研究》．，是本人在导师指导下，在曲阜师范大学攻读壬＇□＾／学位期间独立进行研究工作所取得的成果。论文中除注明部分博±／硕外不包含他人己经发表或撰写的研究成果。对本文的研巧王作做出重要贡献的个人和集体，均已在文中己明确的方式注明。本声明的法律结果将完全由本人承担。作者签名＾皮＾．；曰期：７７曲阜师范大学硏究生学位论文使用授权书＂＂＂＂（根据学位论文类

4、型相应地在ｎ划Ｖ）《鸡ＡＮＸＡ２基在卵泡发育中的表达及调控研究》系本人在曲阜师范大＾学攻读博±〇／硕±＾／学位期间，在导师指导下完成的博±日／硕±９舍位论文。本论文的研究成果归曲阜师范大学和山东农业大学所有，本论文的研究内容不得Ｗ其他单位的名义发表。本人完全了解曲阜师范大学关于保存、使用学位论文的规定，同意学校保留并向有关部口送交论文的复印件和电子版本，允许论文被查阅和借阅。本人授权曲阜师范大学，可采用影印或其他复制手段保存论文，可公开发表论文的全部或部分内容。作者签名：日期：导师签名：日期；＾．■从础終Ｔ八ｉｆ摘要摘要An

5、nexinA2（ANXA2）是一种钙依赖性膜磷脂结合蛋白，存在于生物体的多种细胞类型中。脊椎动物细胞的Annexins被命名为AnnexinA家族。其中AnnexinA2由339个氨基酸组成,分子量为36kD,主要表达于内皮细胞、单核细胞及某些肿瘤细胞中，主要参与细胞膜的形成、细胞膜的转运、胞吞胞吐作用、细胞增殖活动、细胞信号转导、分化及凋亡过程以及血管生成等重要的细胞生命活动。ANXA2基因在多种肿瘤中经常上调表达，如卵巢癌。根据先前的研究结果，我们也发现ANXA2基因在高产蛋率鸡卵巢中表达上调，该结果表明ANXA2基因与禽类卵泡发育成熟相关。本研究利用荧光定量PCR技

6、术，我们研究了ANXA2mRNA在鸡卵巢成熟和卵泡发育过程中的表达变化，结果显示，在未开产鸡卵巢（6周龄）中ANXA2mRNA的表达较低，随着年龄的增长，在开产鸡卵巢（23周龄）中ANXA2mRNA的表达极显著升高（P<0.01）。本实验还收集了产蛋高峰期蛋鸡的各级卵泡，包括POF1（thefirstpost-ovulatoryfollicle）、F1（thefirstlargefollicle）、F3（thethirdlargefollicle）和小白卵泡（SWF，thesmallwhitefollicle），荧光定量PCR检测到不同卵泡中ANXA2mRNA的表达情况如

7、下：从等级前卵泡到排卵前卵泡，随着卵泡的发育，ANXA2mRNA的表达逐渐增加（P<0.01）；多次重复实验显示F1卵泡的ANXA2mRNA表达水平最高，表明ANXA2基因很可能与参与排卵过程；POF1卵泡的ANXA2mRNA表达水平显著下降（P<0.01），并且和SWF卵泡中的ANXA2mRNA表达水平相当。我们分离了F1~F4卵泡的膜细胞和颗粒细胞，荧光定量PCR结果表明ANXA2mRNA在膜细胞中的表达极显著高于颗粒细胞（P<0.01）。在卵泡膜细胞中，FSH和雌激素可促进ANXA2基因的表达，而LH和孕酮对ANXA2基