notch信号通路相关基因在牛卵泡发育中表达情况的初步研究

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1、分类号：Q7单位代码：10193密级：公开学号：2012198硕士学位论文Notch信号通路相关基因在牛卵泡发育中表达情况的初步研究ApreliminarystudyofNotchsignalingpathwaygenesexpressioninbovineovarianfollicledevelopment作者姓名：刘洋学位类别：理学硕士专业名称：生物化学与分子生物学研究方向：免疫化学指导教师：张林波教授田见晖教授所在学院：生命科学学院2015年5月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成

2、果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授

3、权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日摘要目的：Notch信号通路是一条在进化上十分保守的信号通路，Notch

4、信号能够传导相邻细胞间的细胞信号，从而影响细胞的增殖、分化及凋亡。然而Notch信号通路对哺乳动物卵泡发育的调控研究主要集中在对原始卵泡的形成及募集。本实验目的为研究Notch信号通路相关基因在卵泡优势化中的表达变化。以探究在牛卵泡优势化过程中具体哪些Notch信号基因表达会有相应的影响。为进一步研究Notch信号通路调控卵泡发育提供一定的实验依据。方法：本实验取牛优势卵泡和生长卵泡的壁层颗粒细胞/卵丘颗粒细胞，应用PT-PCR筛选、实时定量PCR检测Notch信号通路相关基因Notch2、Jagged1、RBP/Jκ、hes1和c

5、-myc的表达变化。在体外条件下培养生长卵泡的颗粒细胞并通过免疫荧光、细胞转染、MTT法观察Notch信号通路与颗粒细胞增殖之间的关系。随后通过筛选牛优势卵泡Marker分子，作为颗粒细胞优势化的标志，观察刺激/抑制Notch信号通路后其Marker分子的变化情况。结果：筛选出在牛颗粒细胞中表达的Notch家族成员，包括：Notch2、Jagged1、RBP/Jκ、hes1和c-myc。卵泡优势化后壁层颗粒细胞中的Notch2可能表达下调，并会影响其靶基因hes1和c-myc的下调。DAPT（Notch信号通路抑制剂）会抑制颗粒细胞

6、的增殖，过表达N2ICD会促进颗粒细胞的增殖。且卵泡优势化以后颗粒细胞增值速率减缓。成功构建了真核重组质粒CD513B1-c-myc。并通过体外实验发现Notch信号通路可能通过促进靶基因c-myc的表达进而促使细胞增殖。而刺激/抑制Notch信号通路后都不能够使牛优势卵泡Marker分子上调。结论：Notch信号通路与颗粒细胞增殖呈正向相关，同时体外实验发现Notch信号通路可能通过促进靶基因c-myc的表达进而促使细胞增殖。但牛卵泡优势化以后其颗粒细胞增殖速率放缓且刺激或抑制Notch信号通路后都不能够使牛优势卵泡Marker分

7、子上调。关键词：Notch信号通路，牛优势卵泡，颗粒细胞，基因表达IAbstractObjective:Notchsignalingpathwayisahighlyconservedsignalingpathwayinevolution,whichcanbeconductedsignalingmoleculesinbetweencells.SoNotchsignalingpathwaycaninfluencecellproliferation,differentiationandapoptosis.However,nowadaysp

8、eoplearemainlyfocusedontheregulationofNotchsignalingpathwayinmammalianfolliculardevelopmentoftheformationandrecruitme