bmp1基因在动物卵泡发生过程中的表达模式及功能的初步研究

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1、匿ＢＭＰｌ基因在动物卵泡发生过程中的表达模式及功能的巧步研究，４麵雷小灿＇．ＶＸ辟－‘ｆ．與孫矣歌执；，ｒ’學藏，＊＇方巧ｆ編漱篡藻等满．■－霸《１：－ｍｓｍ＾＾０＾學＇輸祖二已二Ｓｆｌ■分类号密级ＵＤＣ博±学位论文ＢＭＰ１基因在动物卵泡发生过程中的表达模式及功能的巧步研究雷小灿学科专业动物遗传育种与繁殖指导教师石德顺研究贸文０庆友研究员论文答辩日期２０１５年１１月２９日学位授予日期答辩委员会主席李慕军教授广西大学学位论文原创性巧使用授权声

2、明本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除己特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大一学或其它单位的学位而使用过的材料。与我同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，目Ｐ：学校有权保存并向国家有关部口或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可Ｗ将学位

3、论文的全部或部分内容编入有关数据库进行、检索和传播，可Ｗ采用影印缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：□保密，在年解密后适用授权。囚不保密。＂＂请在Ｗ上相应方框内打Ｖ）（Ｂ期、论文作者签名；＞０作：焉、指导教师签名：作者联系电话：：电子邮箱ＢＭＰｌ基因在动物卵泡发生过程中的表达模式及功能的初步研究摘要动物卵泡发生调控的分子机制是发育生物学研究的热点问题。有研究表明，骨形态发生蛋白（ＢＭＰｓ）家族广泛参与动物卵泡发生调控的过程－－，其中ＢＭＰ１基因与ＴＧＦＢＭＰ２７基

4、Ｐ家族的因不同，ＢＭＰ１是具有独特蛋白结构域的金属蛋白酶，属于卧红素家族。最新报道显示，ＢＭＰ１基因在绵羊卵泡发生过程中亦有表达，但其在动物卵泡发生中的表达模式和功能仍待深入探索。本研究Ｗ单胎大家畜水牛、多胎家畜猪和多胎试验动物小鼠为模型，系统研究ＢＭＰ１基因在卵泡发生各时期和早期胚胎发育时期表这模式，并通过卵泡颗粒细、体外成熟卵母细胞和活体卵巢试验胞，探讨其发挥调控卵泡发育的分子机制。取得如下结果：１．水牛ＢＭＰ１基因克隆与生物信息分析ｔ＾ＧｅｎＢａｎｋ数据库中牛的ＢＭＰ１（ＸＭ００２６８９７７１．１）

5、为参考序＿列设计合成持异性扩增引物水牛卵巢组织总民ＮＡ为模板，应用－ＲＴＰＣ民成功扩增获得编码水牛ＢＭＰ１１基因ｃＤＮＡ序列。现膊结果表明：水牛ＢＭＰ１基因的ｃＤＮＡ序列长３１％ｂｐ，包含完整的２９６７ｂｐＩ１１１．５的开放读码框，编码９８９个氨基酸，蛋白分子量为ｋＤａ，等电点为７．０８。序列相似性分析结果显示水牛ＢＭＰ１基因与牛、绵羊、猪、人和小鼠ＢＭＰ１基因的核脊酸序列相似性分别为９９％、９８％、％％、〇〇９７％＞５％和％％，１／〇和８９／〇，氨基酸相似性分别为９９％、９、９６％、Ｓ一ＢＭＰ进步构

6、建系统进化树表明１基因在动物进化过程中具有高度的保守特性。蛋白结构域分析显示水牛ＢＭＰ１基因具有显著的ＨＥＬＧＨＶＩＧＦＷＨＥ巧离子结合域和保守的Ｍｅｔ－ｔｕｍＳＩＭＨＹ区，含有一一ＥＧＦ－Ｌ个巧离子结合区ｉｋｅ功个前蛋白区，、五个ＣＭＢ和两个ＢＭＷ一能区，与其他物种基因的结构域相同或相似，成功克隆了种水牛物种的新型金属蛋白酶。２．ＢＭＰ１基因在水牛卵泡发生过程中的表达模式研究ＰＣ民（Ｔ－ＰＣＲＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｎ首先通过实时萊光定量ＱＲ）和ｉｇ分析了ＢＭＰ１基因在水牛不同组织器官中的表达模式及规律

7、。结果显示，ＢＭＰ１基因在水牛胎儿时期不同组织中都有表达且差异显著（戶＜０．０５），其中在也脏中表达最高，卵巢和睾丸次之。此外，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｉｎ结果发现，ＢＭＰ１基因Ｗ不同剪切体的形式存在于水牛不同ｇＲＴ－ＰＣ民检测结的组织当中，。分离不同直径的水牛卵泡，Ｑ果显示ＢＭＰ１基因在卵泡中的表达呈现随着卵泡直径的增大而逐渐升高的？ＢＭＰ３４．５ｍｍ，且不同直径卵泡间１趋势，在直径卵泡中表达量最高基因的表达差异显著（戶＜〇．〇５）。免疫组化分析结果显示，ＢＭＰ１基因从水牛胎儿时期的卵巢，Ｗ及到性成熟么后的水

8、牛的卵巢中的不同发育时期的卵泡中都有不同程度的表达，并主要表达于卵母细胞和颗ＩＩ粒细胞中。免疫巧光检测结果显示，ＢＭＰｌ基因特异性的定位于颗粒ＲＴ－