aqp9基因在水牛卵泡颗粒细胞中的表达及其与细胞凋亡的初步研究

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1、巧古学化Ｉ胃乂Ｐ９基因在水牛卵泡颗粒细胞中的表达Ｑ及其与细胞涧长的巧步研究屈春凤爲、巧乂學二〇—五年六月分类号Ｓ８１４．８密级却ＵＤＣ编号硕：ｔ学位论文ＡＱＰ９基因在水牛卵泡颗粒细胞中的表达及其与细胞稠ｔ的巧步研究屈春凤学科专业动物遗传育种与繁殖指导教师李湘萍研究员刘庆友研究员论文答辩日期２０－５－２６１５授予日期答辨委员会主庶卢克焕教授广西大学学位论文原创性和使用授权声明本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所

2、取得，论文不包含任何其他个的研究成果。除已特别加Ｗ标注和致谢的地方外人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大一学或其它单位的学位而使用过的材料。与我同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归，即；学校有属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权权保存并向国家有关部口或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅巧借阅，可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行

3、。、汇检索和传播，可采用影印、缩印或其它复制手段保存编学位论文本学位论文属于：□保密，在年解密后适用授权。■５２１不保密。＂＂请在Ｗ上相应方框内打Ｖ）（沁论文作者签名：日期；：日期指导教师签名／＾抑作者联系电话：电子邮箱：ＡＱＰ９基因在水牛卵泡颗粒细胞中的表达及其与细胞调ｔ的初步硏究摘要一水通道蛋白（Ａｑｕａｐｏｒｉｎｓ，ＡＱＰｓ）是类位于原核和真核生物细胞膜上，、与水的运输密切相关的特异膜通道蛋白。对小鼠及人的研究发现除水转运功能外，部分ＡＱＰｓ参与卵泡形成和

4、发育，与颗粒细胞的调亡、卵泡闭锁及雌性动物生育力密切相关，但对其作用机理尚不完全清晰。本研究克隆了水牛ＡＱＰ９基因的编码区序列，分析其在水牛卵泡和早期胚胎发育过程中的表达规律ｉ，Ｕｌ及不同闭锁程度卵泡颗粒细胞和体外成熟卵母细胞周围卵丘细胞中的ＡＱＰ９与稠亡相关基因的表达水平；其次，通过过表达ＡＱＰ９基因及添加ＰＫＣ抑制剂Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ的方式探索了ＡＱＰ９基因表达与水牛颗粒细胞调亡的关系，及ＡＱＰ９基因在ＰＫＣ信号通路调控的颗粒细胞洞亡中的作用、提高水牛。研究可为深入了解水牛卵

5、泡闭锁发生机制繁殖性能奠定基础：。主要研究结果如下－首先，应用ＲＴＰＣＲ方法克隆得到水牛ＡＱＰ９基因８８８ｂｐ的编码区序列，生物信息学预测其编码２９５个氨基酸。多重序列比较显示，水牛ＡＱＰ９９９％、９０％、９７％、８８％基因与牛、猪、绵羊和人相应序列相似性分别为；氨基酸序列同源性分别为９９％、８６％、９７％、８３％，系统进化树分析结果显。，示，ＡＱＰ９基因在物种进化过程中具有高度保守性蛋白质结构分析显示水牛ＡＱＰ９蛋白含有１７个苏氨酸（Ｔｈｒ），不含有信号狀，存在潜在的稱Ｉ酸化位点和水通

6、道蛋白特有的结构域ＰｆａｍＭＩＰ。其次，对ＡＱＰ９基因在水牛雌性生殖细胞中的表达规律研究发现：ＡＱＰ９蛋白在水牛原始ＲＴ－ＰＣＲ、初级、次级和有腔卵泡颗粒细胞中均有表达。ｑ分析结果显示，与ＧＶ期相比，ＡＱＰ９基因在体外成熟的Ｍｎ期卵母细胞中Ｋ０－４－的表达水平显著升高．０５），细胞巧胎及桑椎胚中未检测（／在２细胞、，到其表达囊化期有表达。在不同闭锁程度水牛卵泡颗粒细胞中，随着卵泡闭锁程度加深，ＡＱＰ９及调亡相关基因Ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ３和Ｆａｓ的表达呈上升趋势，其中ＡＱＰ９基因的表达在早期

7、闭锁卵泡中显著升高（／？＜０．０５）。在不同体外成熟质量卵母细胞周围卵丘细胞中的表达分析发现，与成熟质量好的卵母细胞卵丘细胞相比，ＡＱＰ９基因在成熟质量差的卵五细施中的表达显著升高（Ｋ０．０１）；同时调亡相关基因Ｂａｘ、ｃａｓａｓｅ３和Ｆａｓ的表达也显／ｐ著升高（／Ｋ０．０５）。最后，在探讨水牛颗粒细胞调亡与ＡＱＰ９表达关系的研究发现：过表ＡＱＰ９基因的水牛颗粒细胞经无血清培养可显著上ＡＱＰ９及调亡相关基因Ｂａｘ－＜０、ｃａｓｐａｓｅ３、Ｆａｓ的表达，显著下调Ｂｃｌ２的表达（／７．０５）。在分

8、析ＰＫＣ抑制剂Ｓｔａｕｒｏｓｏｒｉｎｅ介导的水牛颗粒细胞调亡与ＡＱＰ９基因表达关系的实ｐ验中发现，Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ处理的水牛颗粒细胞，其形态出现塌陷，细胞膜出现拉丝样向周围分散，胞质空泡增多，悬浮死亡细胞增多，流式分析结果显示，ＳｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅＷ浓度依赖型促进颗粒细胞涧亡，且随着