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1、FQ-PCR与ELISA法检测婴幼儿巨细胞病毒感染的比较研究邓国伟湖南省益阳市资阳区妇幼保健院413001【摘要】目的：探讨FQ・PCR与ELISA法检测诊断婴幼儿巨细胞病毒感染的临床价值。方法：选取我院2012年12月・2014年12月间135例临床疑似婴幼儿巨细胞病毒感染患儿为研究对象，采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测患儿的血清HCMV-IgM抗体，同时采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测患儿尿液HCMV-DNA水平。结果：ELISA法检测血清HCMV-IgM的阳性率为16.30%,FQ-PCR法检测尿HCMV-D
2、NA的阳性率为36.30%,FQ-PCR法检测阳性率明显高于ELISA法，两组数据比较有统计学差异(P<0.01)；二者检测HCMV感染的一致率为78.52%o结论:相比于ELISA法检测，FQ-PCR法监测尿HCMV-DNA,检出率和敏感性更高，简单易行，在HCMV的早期诊断和疗效判断中有重要意义，有临床推广价值。【关键词】巨细胞病毒；婴幼儿；聚合酶链反应；酶联免疫吸附试验人巨细胞病毒(HCMV)是一种线状双链DNA病毒，是我国婴幼儿常见的感染病之一，其病变能累及多个系统器官，且无特异性临床表现，只在尿中排毒［1］。因此，对婴
3、幼儿巨细胞病毒感染做出早期诊断具有极其重要的意义。木文采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)与酶联免疫吸附试验(ELISA)两种检测方法对135例疑似婴幼儿巨细胞病毒感染患儿进行实验室检查，并对检测结果进行了对比分析，现将结果汇报如下。1资料与方法1.1一般资料木研究病例选自2012年12月-2014年12月来我院就诊的确诊或疑似HCMV感染患儿，共135例，收集入选患儿的尿液和血清标木，其中男71例，女64例，年龄2个月・5岁，平均(2.8±0.7)岁。依据《巨细胞病毒感染诊断方案》[2],CMV-lgM阳性表示为活
4、动性或原发CMV感染，尿液PCR-CMV-DNA阳性则可诊断为CMV感染并有产毒性。1.2方法121采集标本：采集所有入选患儿静脉血2ml,进行血清分离，并放置在・20°C冰箱保存，尽量一周内进彳亍HCMV・lgM检测；留取所有患儿3ml新鲜晨尿，置于无菌干燥管中，Id内进行HCMV・DNA检测。1.2.2实验室检测(1)尿HCMV-DNA检测。使用FQ・PCR法检测，仪器采用LightCycler荧光定量PCR仪，CMV-DNA检测采用广州中山达安基因公司提供的试剂盒，检测范围为103〜107copi-es/mlo严格按照试剂盒说明
5、书进行提取尿液HCMV-DNA操作。进行实吋荧光定量PCR的扩增，操作条件为93°C,2分钟预变性；93°C,45s,55°C,60s,计10个循环;93°C,30s,55°C45s,计30个循环;最终在55摄氏度45s处进行单点荧光检测。反应体系是50μl,选用FAM通道进行HCMV・DNA定量检测，依据质控标准，结果＞l×103copies/ml判定为阳性⑶。(2)HCMV-IgM检测。采用ELISA法检测，采用上海贝尔公司提供的试剂盒，按照试剂说明书操作并判断结果。1.3数据处理方法本研究数据采用SPSS17.
6、0处理分析，计数资料间比较采用X?检验，以*0.05为检验水准。2结果。ELISA法检测血清HCMV-IgM阳性率与FQ-PCR法检测尿HCMV-DNA阳性率比较有统计学差异(X?=13.93,P<0.01),Zl者检测HCMV感染的一致率为78.52%(106/135)o详见表4表1血清HCMV-IgM与尿HCMV-DNA检测结果(n)HCMV-IgM检测结果尿HCMV-DNA检测合计HCMV-DNA阳性HCMV・DNA阴性HCMV-IgM21122HCMV-IgM2885113合计49861353讨论HCMV属于疱疹病毒科&
7、beta;亚科，其直径为180-250nm,HCMV感染在我国流行广泛，尤其是免疫力低下的小儿及胎儿容易受害，是引发小儿智力低下、发育迟缓、先天畸形的重要病原体。目前临床上治疗HCMV感染主要采用更昔洛韦，其抗HCMV特异性较强，疗效较好，对小儿HCMV感染进行早期、准确、快速的诊断，对患儿合理、及时治疗及其预后有积极的意义。临床上检测HCMV的经典方法是病毒分离，不过HCMV病毒分离培养比较困难，且受多种影响因索干扰，分离敏感性较差，临床实验室不宜开展应用。临床上应用较多的检测技术则是ELISA检测法，该检测方法是活动性HCMV感染
8、的重要评估指标，它通常在机体感染后3・5d出现，且能够持续至3・6个月。同吋，临床上还常用FQ-PCR法对HCMV感染进行检测。研究资料显示，该检测方法能快速且准确的检测各类病原体,它能在HCMV感染早期灵敏的检测到HC
