慢性鼻—鼻窦炎细菌pcr检测和传统培养对比的分析

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1、青岛大学硕士学位论文慢性鼻--鼻窦炎细菌PCR检测和传统培养对比分析姓名：白伟红申请学位级别：硕士专业：耳鼻咽喉科学指导教师：鞠建宝20120602慢性鼻一鼻窦炎细菌PCR检测和传统培养对比分析摘要目的应用聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction,PCR)法检测鼻窦脓黏膜标本中5种常见需氧菌的分布，并与传统培养法比较，旨在探讨PCR法在慢性鼻．鼻窦炎(ChronicRhinosinusitis，CRS)细菌检测中的临床应用价值，并了解CRS中的常见菌群分布。方法①收集30例CRS手术患者的鼻窦脓黏膜标本分为两份，一份标本行传统需氧菌培养及药敏试验，另一份标本置．80℃冰

2、箱保存用于后续PCR法检测。②依据文献报道并参考同期的传统细菌培养结果，确立本次实验检测的5种实验菌。引用文献报道的细菌通用引物和5种实验菌菌种特异性引物对上述临床标本进行PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物，最后在紫外检测仪下观察结果并拍照。设立实验菌的标准菌株作为阳性对照，无菌双蒸水作为阴性对照。结果①传统细菌培养结果显示：30例标本中需氧菌培养的总阳性率为80．0％(24／30)，主要菌种培养阳性率分别为凝固酶阴性葡萄球菌43．3％(13／30)、草绿色链球菌和干燥奈瑟菌各20．0％(6／30)、表皮葡萄球菌13．3％(4／30)、肺炎克雷伯菌10．O％(3／30)、金黄色葡萄球菌

3、6．7％(2／30)等。②PCR检测结果显示：30例标本中细菌总阳性率为83．3％(25／30)，5种实验菌的阳性率分别为表皮葡萄球菌40．0％(12／30)、肺炎克雷伯菌36．7％(11／30)、金黄色葡萄球菌23．3％(7／30)、流感嗜血杆菌10．0％(3／30)，肺炎链球菌0．0％(0／30)。③两种方法检出表皮葡萄球菌和肺炎克雷伯菌的阳性率经配对Z检验存在统计学差异，f值均为6．2，P0．05。以细菌培养为参考标准，PCR技术对表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌的敏

4、感性均为100％，特异性分别为69．2％、70．4％和82．1％，一致性分别为73．3％、73．3％和83．3％。结论①与传统细菌培养法比较，PCR法是一种更敏感的检测方法，且简便快速，在CRS细菌的鉴定中具有一定的临床应用价值，有望和传统培养法相结合成为客观、全面认识CRS菌群分布的一种新途径。②两种方法检出的CRS优势菌存在一定差异，表皮葡萄球菌和肺炎克雷伯菌可能是本地区CRS细菌感染的主要菌种。关键字：慢性鼻．鼻窦炎；聚合酶链反应；细菌培养／I煳嬲AnalysisBacteriaDetectionUsingthePolymeraseChainReactionandComparingT

5、hemWithCultureMethodsinChronicRhinosinusitisAbstractobjeetives：Tostudytheclinicvalueofbacteriadetectionusingthepolymerasechainreaction(PCR)inchromcrhinosinusitisbyidentifyingaerobicbacterialcontentpresentonsinonasalmucosaspecimensusingPCRtechniqueandcomparingthem丽thculturemethodsandtorealizepredom

6、inantaerobesinbacterialinfectionofCRS．Methods：Sinonasalmucosaspecimensof30patientsundergoingendoscopicsinussurgeryforCRSwerecollectedandwcTedividedintotwopart．Onesampleswereprocessedforaerobicculturesandantibioticsusceptibilityusingastandardculturetechnique；theothersampleswerefrozenat一800Cfordetec

7、tionofPCRtechnique．Accordingtoreferenceliteratureandsimultaneouscultureresults，fivedifferentkindofexperimentalstrainswereestablished．Theprimersthatcontainedtheuniversalprimersforthe16SrRNAgeneinbacteriaandexperim