多种鱼类血清ig广谱型单克隆抗体的筛选与分析

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1、福建师范大学王希龙硕士学位论文黄鱼、青石斑鱼、斜带髭鲷、美国红鱼、褐菖鼬、鳜、加州鲈等26种经济鱼类血清免疫球蛋白进行交叉反应。构建了这些单克隆抗体与26种经济鱼类血清免疫球蛋白反应交叉谱。其中大黄鱼血清Ig单克隆抗体2H5F4可以识别大黄鱼、鳜鱼、加州鲈鱼、卵形鲳鲣、尼罗罗非鱼、花鲈、红罗非、青石斑鱼、斜带髭鲷、美国红鱼、黑鲷、鲤鱼、黑脊倒刺鳃、平胸鲂、白鲫鱼、大菱鲆、褐菖触18种经济鱼类血清免疫球蛋白。单抗2H5F4识别谱广、反应强度大、特异性强，可以作为制备鱼类免疫球蛋白广谱检测试剂的优良备选抗体。欧鳗Ig单克隆抗体7E2可以与欧洲

2、鳗鲡、鳜鱼、鲤鱼、翘嘴红鲇、平胸鲂、白鲫鱼、海鳗、斑点叉尾鲴、黄颡鱼、革胡子鲶、鲶鱼发生交叉反应，将单抗2H5F4与单抗7E2等比例混合后能够与所采集的除牙鲆外的25种鱼类血清免疫球蛋白发生反应。利用筛选到的广谱型单克隆抗体7F12F6、2H5F4对多种鱼类血清Ig的共同抗原表位进行了初步研究。其中单抗7F12F6可以识别同为鲈形目的鳜鱼、加州鲈鱼、花鲈、大黄鱼、美国红鱼、黑鲷六种鱼的轻链，表明这六种鱼的血清Ig具有相同或相似的抗原表位。单抗2H5F4识别鱼类免疫球蛋白的重链，在变性还原条件下蛋白印迹显示该单抗仅与大黄鱼、青石斑鱼、斜带髭

3、鲷、美国红鱼、褐菖触等五种鱼免疫球蛋白的重链发生反应，在非变性非还原条件下还能识别鳜、加州鲈鱼、卵形鲳鳄、尼罗罗非鱼、花鲈、红罗非鱼、美国红鱼、黑鲷、大菱鲆、鲤鱼、黑脊倒刺鲍、平胸鲂、白鲫鱼、褐菖触等另外13种供试鱼的免疫球蛋白。上述研究结果提示：不同鱼类免疫球蛋白之间存在共同抗原位点，单抗2H5F4所识别的抗原位点在大黄鱼、青石斑鱼、斜带髭鲷、美国红鱼、褐菖鼬等5种鱼中表现为非结构依赖性位点，其反应特性不受变性剂的影响，而在其余13种鱼中则表现为结构依赖性位点，且在变性条件下失去反应活性。应用2H5F4测定免疫与非免疫尼罗罗非鱼、鲤鱼血

4、清抗体水平，试验结果表明免疫组检测到了较高的特异性抗体水平，该单抗可以应用于尼罗罗非鱼、鲤鱼的免疫检测当中。本研究筛选到的单克隆抗体2H5F4可以作为鱼类血清免疫球蛋白广谱型单抗检测试剂的优良选择。对于单抗7F12F6、2H5F4所识别的抗原表位有待实验的进一步研究。VIII目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯IAbstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．⋯．IIl中文文摘⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯VIIliI录⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯．．．．．⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．IX绪论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯．．．⋯⋯．⋯．。⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯．⋯．⋯⋯⋯⋯⋯。．1．1．1鱼类的免疫系统⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1．1．2鱼类免疫球蛋白的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。1．3单克隆抗体技术在水产养殖中的应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．14．1．4本研究的目的意义⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．17．第一章鱼类血清的采集及其蛋白浓度测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．19．1．1前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．19．1．2材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．19．1．3方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．20．1．3．1血清制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．20．1．3．2蛋白浓度测定

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．21．1．4结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．21．1．4．1所采集鱼类血清蛋白浓度⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．21．1．4．2不同鱼种之间血清总蛋白浓度之间比较⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．22．1．5讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．23．第二章鱼类血清Ig的纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．25．

8、第一节优球蛋白法纯化欧鳗Ig方法的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．-25—2．1前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．25．2．2材料