copd动态mirna表达谱的构建及血清mirna分子标志物的筛选与鉴定

《copd动态mirna表达谱的构建及血清mirna分子标志物的筛选与鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、万方数据中图分类号UDCR563．3610博士学位论文学校代码!Q533COPD动态miRNA表达谱的构建及血清miRNA分子标志物的筛选与鉴定ConstructionofdynamicmiRNAexpressionprofilingandidentificationofserummicroRNAbiomarkersin作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：副指导教师：COPD谢丽华临床医学内科学湘雅三医院孙圣华教授武明花教授论文答辩日期矽伸．s．彤答辩委员会主席中南大学二。一四年五月一Cn丫：八万方数据学位论文原创性声明本人郑重声

2、明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特另tlDil以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：!辛!量日期：堕年工月!日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许

3、本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：日期：旦年工月兰日差一茎乏缉万方数据COPD动态miRNA表达谱的构建及血清miRNA分子标志物的筛选与鉴定摘要背景：COPD是一个严重的公共卫生问题，其发病率逐年增高与吸烟和大气污染日益严重相关。COPD主要特征包括慢性支气管炎和肺气肿，临床表现为进行性发展的气流受限和肺部异常炎症反应。COPD患者病情反复急性加重可以增加发病率和死亡率。吸烟是COPD发病最重要的危险因素，与95

4、％的COPD发病有关。然而早期COPD患者缺乏特异性症状，目前尚无公认COPD发生发展的相关分子标志物，因此在COPD患者和高危人群中寻找分子标志物，有助于COPD的早期防治。miRNAs是一类长约22个核苷酸的内源性非编码小RNA，通过与靶基因3’端非翻译区结合发挥抑制翻译作用或导致mRNA完全降解。目前已发现数千种miRNAs，可参与调节许多重要生物学过程如：发育、凋亡、细胞增殖、造血等。miRNA在血清及血浆中非常稳定地存在，可以抵抗内源性RNA酶，在多种储存条件和反复冻融情况下亦可保持稳定。近年来研究发现循环miRNA可能成为一些疾病的分子标

5、志物如：肺癌、胃癌、败血症和肺结核等。目前在COPD发展过程中血清miRNA的相关研究甚少，仅一项土耳其小样本研究发现COPD外周血清存在miRNA表达异常，且miRNA在COPD发病机制中发挥何种作用仍不清楚，血清miRNA是否可能成为COPD早期诊断标志物，有赖于进一步深入研究。目的：本研究拟通过建立COPD动态大鼠模型，了解肺部病理改变，同时对COPD不同时期大鼠肺组织进行miRNA表达谱分析，将差异表达的miRNA进行生物信息学分析。并在此基础上，选择差异表达miRNA在COPD患者外周血清中进行检测，以寻找COPD早期诊断分子标志物。方法：

6、1、将雄性Wistar大鼠随机分为6组，包括对照组、吸烟2周组、吸烟4周组、吸烟6周组、吸烟8周组、吸烟15周+气管内滴注猪胰弹性蛋白酶组，每组各5只，建立香烟诱导COPD动态大鼠模型，同时进行病理学观察其形态学改变。2、取对照组、吸烟4周组、吸烟15周+气管内滴注猪胰弹性蛋白酶组大鼠肺组织各2例用于miRNA表达谱芯片分析。3、实时荧光定量PCR法检测异常表达miRNA，验证芯片数据。4、运用生物信息学法对miRNA表达谱进万方数据行靶基因预测、聚类分析及GO和Pathway分析。5、将研究对象分为健康对照组、重度吸烟组、COPD组，共收集各组外周

7、血清及临床资料。6、运用实时荧光定量PCR法检测各组外周血清miR．21、miR．181a、miR．146a表达水平。7、对血清miR一21、miR一181a表达进行ROC分析。结果：1、成功建立COPD动态大鼠模型，大鼠肺组织出现早期以炎症细胞浸润为主晚期出现肺气肿改变的动态病理变化。2、成功建立miRNA动态表达谱，在熏烟4周组共有30个miRNAs异常表达，熏烟15周组共有37个miRNAs异常表达。3、对表达差异较明显的6个miRNAs进一步进行验证，结果显示miR．206、miR．146a、miR一147、miR．21、miR．181a和m

8、iR-92a．2木的变化趋势与miRNA芯片数据一致，证实了芯片数据的可靠性。4、生物信息学分析显示异常表达