糖尿病大鼠下丘脑室旁核血管紧张素-ⅱ免疫阳性神经元的变化

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1、内蒙古医学院硕士研究生学位论文(2008年)唧reSSionofATlinhypOthal锄icparaventdcul{lr肌deus(P、厂N)weres蛳ficantlyeveV种edinratsof出abeticg∞upweresigIlificantlyhigherthanthatofoOntroIg∞up，butthevaluesmratsot山abetlcg∞upweres培m士lcantlymgnertnantnaltot0。毗r以g∞up'Duttne删ueswerek)werthanthatofodiabeticgrOupat7thweekS．EXpressi(mi

2、ntensityofATlat2wkwaSsignificantlyhighertkmthat0f∞ntrdgroupateVe巧pointsoftiHle，arldexpreSSionin·tenSityof√气Tlat7th、Ⅳeekand12thweekwaSsignificantlyh遮hertkmthatofcontrdgrOupateverypointsoftime，butthedifferencewaSnotsignificantoomparingwiththatof2th．Co眦l吣io璐1．P、wJ气ng—IImayplayaniIllpOrtantroleinthe

3、pathogeneSiofDM，andAng—IIimmunoreactivendlr(msinvdumewassignificantlyincreaSedwiththepasSageoftirlle．ATlexpreSSionwaSsignificantlyincreased，buttheexpreSSiondidn’tcontinuetoin—creaSewiththepasSageoftime．TheresultsmayhelpexplainDM：patientswith∞n删tants舯pt伽【1S，suchaShypenenSion．2．Chang邵ofAng—IIimmun

4、eactiVityinPvNunder出a—beticconditionmaybeoneaSpectofinfluencediabeteSexertsonnervouSsySt锄andI认S．KeywordsDiabeteSA唱一IIATlPVNIn埘．unohistOcheⅡlist巧内蒙古医学院硕士研究生学位论文(2008年)L者定为糖尿病大鼠。成模后每周监测一次尿糖，实验期间对糖尿病大鼠未使用胰岛素治疗。对照组，采取注射同体积0．1mol／L枸橼酸一枸橼酸钠缓冲液(以0．1mol／LpH4．2枸橼酸一枸橼酸钠缓冲液新鲜配成2％的溶液)。1．3糖尿病组大鼠一般症状和体征动物成模后：

5、第10天观察大鼠出现多饮、多食、多尿、体重减轻、活动减少等症状。1．4鼠脑组织下丘脑区间定位根据网址：http：／／www．mbl．org／atlas／atlas．php所提供的大鼠的脑图谱参照，取正中隆起作放免测定。将下匠脑从前至后，在前囟后2．1mm，3．3mn-处冠状面各切一刀，得约lrnm厚的脑组织。再于距脑底0．3nm，，距第三脑室0．5n姗处各切一刀，耳i】可得正中隆起。(如图1)、一IBc一图】定位鼠脑组织不惹图A：大鼠全脑分区图B：大鼠全脑冠状切片图C：犬鼠全脑冠状切片HE染色1．5标本处理1．5．1采血于成模后分别在第2，7，12周，即糖尿病早，中，后期⋯j，对照组和

6、糖尿病组各取6只大鼠，2％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉下开胸。用无菌注射器从左心室内采血5ml，室温静置析出血清，10000r／nlin离心，提取上清液，一70℃低温冰箱保存备用。1．5．2脑组织冰冻切片免疫组化标本常规灌注固定取脑，留取各实验组大鼠脑组织，采用鼠脑组织下丘脑区间定位方法找到下丘脑室旁核，立即用OTC包埋切片或装入冻存管中并置人液氮中速冻，放置到液氮或一80℃超低温冰箱中备用。1．6免疫组织化学染色1．6．1脑组织表达Ang—II、AT，标记内蒙古医学院硕士研究生学位论文(2008年)(1)取保存的脑组织或新鲜取材的各组大鼠脑组织组织，用OCr包埋，恒冷切片机制片(片厚10肿

7、)，贴于棚胶片上；(2)冰丙酮固定，10“n；(3)室温情况下干燥；(4)PBS浸洗2rnin×3；(5)0．3％H2Q—PBs，室温，10血n；(6)PBS浸洗2min×3；(7)分别加一抗：兔抗鼠Ang—II多克隆浓缩型抗体和兔抗鼠AT。多克隆浓缩型抗体，1：100，4℃冰箱过夜；(8)复温，PBS浸洗2min×3；(9)加二抗：生物素化羊抗兔IgG，1：100，室温下60min；(10)PBS浸洗2min×3；(11)n蟠显色，室温，5一