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时间:2019-02-13
《糖尿病大鼠下丘脑室旁核血管紧张素-ⅱ免疫阳性神经元的变化》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、内蒙古医学院硕士研究生学位论文(2008年)唧reSSionofATlinhypOthal锄icparaventdcul{lr肌deus(P、厂N)weres蛳ficantlyeveV种edinratsof出abeticg∞upweresigIlificantlyhigherthanthatofoOntroIg∞up,butthevaluesmratsot山abetlcg∞upweres培m士lcantlymgnertnantnaltot0。毗r以g∞up'Duttne删ueswerek)werthanthatofodiabeticgrOupat7thweekS.EXpressi(mi
2、ntensityofATlat2wkwaSsignificantlyhighertkmthat0f∞ntrdgroupateVe巧pointsoftiHle,arldexpreSSionin·tenSityof√气Tlat7th、Ⅳeekand12thweekwaSsignificantlyh遮hertkmthatofcontrdgrOupateverypointsoftime,butthedifferencewaSnotsignificantoomparingwiththatof2th.Co眦l吣io璐1.P、wJ气ng—IImayplayaniIllpOrtantroleinthe
3、pathogeneSiofDM,andAng—IIimmunoreactivendlr(msinvdumewassignificantlyincreaSedwiththepasSageoftirlle.ATlexpreSSionwaSsignificantlyincreased,buttheexpreSSiondidn’tcontinuetoin—creaSewiththepasSageoftime.TheresultsmayhelpexplainDM:patientswith∞n删tants舯pt伽【1S,suchaShypenenSion.2.Chang邵ofAng—IIimmun
4、eactiVityinPvNunder出a—beticconditionmaybeoneaSpectofinfluencediabeteSexertsonnervouSsySt锄andI认S.KeywordsDiabeteSA唱一IIATlPVNIn埘.unohistOcheⅡlist巧内蒙古医学院硕士研究生学位论文(2008年)L者定为糖尿病大鼠。成模后每周监测一次尿糖,实验期间对糖尿病大鼠未使用胰岛素治疗。对照组,采取注射同体积0.1mol/L枸橼酸一枸橼酸钠缓冲液(以0.1mol/LpH4.2枸橼酸一枸橼酸钠缓冲液新鲜配成2%的溶液)。1.3糖尿病组大鼠一般症状和体征动物成模后:
5、第10天观察大鼠出现多饮、多食、多尿、体重减轻、活动减少等症状。1.4鼠脑组织下丘脑区间定位根据网址:http://www.mbl.org/atlas/atlas.php所提供的大鼠的脑图谱参照,取正中隆起作放免测定。将下匠脑从前至后,在前囟后2.1mm,3.3mn-处冠状面各切一刀,得约lrnm厚的脑组织。再于距脑底0.3nm,,距第三脑室0.5n姗处各切一刀,耳i】可得正中隆起。(如图1)、一IBc一图】定位鼠脑组织不惹图A:大鼠全脑分区图B:大鼠全脑冠状切片图C:犬鼠全脑冠状切片HE染色1.5标本处理1.5.1采血于成模后分别在第2,7,12周,即糖尿病早,中,后期⋯j,对照组和
6、糖尿病组各取6只大鼠,2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉下开胸。用无菌注射器从左心室内采血5ml,室温静置析出血清,10000r/nlin离心,提取上清液,一70℃低温冰箱保存备用。1.5.2脑组织冰冻切片免疫组化标本常规灌注固定取脑,留取各实验组大鼠脑组织,采用鼠脑组织下丘脑区间定位方法找到下丘脑室旁核,立即用OTC包埋切片或装入冻存管中并置人液氮中速冻,放置到液氮或一80℃超低温冰箱中备用。1.6免疫组织化学染色1.6.1脑组织表达Ang—II、AT,标记内蒙古医学院硕士研究生学位论文(2008年)(1)取保存的脑组织或新鲜取材的各组大鼠脑组织组织,用OCr包埋,恒冷切片机制片(片厚10肿
7、),贴于棚胶片上;(2)冰丙酮固定,10“n;(3)室温情况下干燥;(4)PBS浸洗2rnin×3;(5)0.3%H2Q—PBs,室温,10血n;(6)PBS浸洗2min×3;(7)分别加一抗:兔抗鼠Ang—II多克隆浓缩型抗体和兔抗鼠AT。多克隆浓缩型抗体,1:100,4℃冰箱过夜;(8)复温,PBS浸洗2min×3;(9)加二抗:生物素化羊抗兔IgG,1:100,室温下60min;(10)PBS浸洗2min×3;(11)n蟠显色,室温,5一
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