应激大鼠下丘脑血管紧张素原mrna的表达

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1、应激大鼠下丘脑血管紧张素原mRNA的表达摘要:目的观察应激时大鼠下丘脑血管紧张素原mRNA表达及血管紧张素Ⅱ含量的变化.方法雄性大鼠48只随机分为3组，游泳组予以4℃～6℃冷水游泳刺激;电击组予以0.5～2Hz，60～100V足底电刺激，每日2次，每次2h，持续1RNA的表达及血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）含量的变化.结果应激大鼠下丘脑AngmRNA阳性表达面积百分比与积分吸光度均显著增高.游泳组（2.48±0.40）%与（0.75±0.09），电击组（2.94±0.82）%与（1.83±0.41）vs对照组（0.20±

2、0.04）%与（0.24±0.12），P<0.01;AngⅡ含量也显著增高.游泳组（141±67）ngg-1，电击组（84±25）ngg-1vs对照组（56±16）ngg-1，P<0.01，P<0.05，且AngmRNA表达增高率（1216±196）%和（1441±402）%，超过了AngⅡ含量的增高率（295±118）%和（149±44）%，P<0.01.结论应激时下丘脑肾素-血管紧张素系统（RAS）被显著激活，进一步支持局部RAS参与了应激反应的观点.　　Keyus;angiotensi

3、nogenmRNA;insituhybridizationAbstract:AIMToinvestigatetheexpressionofan-giotensinogen（Ang）mRNAandthechangesofangiotensinⅡ（AngⅡ）contentsinrathypothalamusduringstress.METHODSForty-eightmaleratslyallocatedtothreegroups.Smingratsmingstimulationin4℃～6℃colde;andcont

4、rolratsulation.ThenAngmRNAexpressioninhypothalamusinedbyusinginsituhybridizationtechnique，andAngⅡcontentsRNApositiveexpressionminggroup（2.48±0.40）%and（0.75±0.09），electricshockgroup（2.94±0.82）%and（1.83±0.41），vscontrolgroup（0.20±0.04）%and（0.24±0.12），P<0.01］，A

5、ngⅡcontentsminggroup（141±67）ngg-1，electricshockgroup（84±25）ngg-1，vscontrolgroup（56±16）ngg-1，P<0.01，P<0.05］，andtheincreasedratesofAngmRNA［（1216±196）%and（1441±402）%］surpassedtheonesofAngⅡcontents［（295±118）%and（149±44）%］（P<0.01）.CONCLUSIONThelocalrenin-a

6、ngiotensinsystem（RAS）inhypothalamusisobviouslyactivatedduringstress，，RAS）本身确有激活，则未曾作深入研究.我们采用原位杂交技术观察应激时大鼠下丘脑血管紧张素原（angio-tensinogen，Ang）mRNA表达情况，旨在确定应激时下丘脑局部RAS有无激活，以及激活的程度，以对下丘脑中枢RAS在应激时的作用作出评价，为RAS是否参与了应激反应提供进一步的实验依据.　　1材料和方法　　1.1材料健康雄性SD大鼠，体质量250～350g，由武汉大

7、学医学院实验动物中心提供.125I-AngⅡ放免分析测定盒购自中国同位素公司北方免疫试剂研究所;即用型链霉亲和素过氧化物酶溶液及过氧化物酶阻断剂购自福州迈新公司;血管紧张素原（Ang）mRNA探针为24碱基寡聚核苷酸，序列为5’-AAAGGGGTGGATGTATACGCGGTC-3’，由上海生工生物工程有限公司合成，探针用biotin在5’端标记.γ-计数器为美国Packard公司产B5002-01型;图像分析仪为国产HPIAS-1000型.　　1.2方法动物在实验1in）立即处理;②慢性电击组:采用间断足底电击作

8、为应激源.输出电压为60～100V，不定时改变电压，频率0.5～2Hz.每日上下午各2h，持续1L（制备血浆），取下丘脑组织匀浆，经0.5moLL-1醋酸提取，上清液用双蒸水稀释10倍，按试剂盒说明测定AngⅡ含量.下丘脑AngmRNA表达的测定用原位杂交法.40gL-1多聚甲醛心脏灌流固定成功后，取下丘脑组织石蜡包埋.切片3μm，脱蜡后经过氧化物酶阻断剂和