小鼠胚胎干细胞来源神经前体细胞的移植研究及兔脾成纤维样细胞的多功能性研究

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1、generationswithoutexogenousLIF，andmESCs-RSFsdidnotlosetheirspecificmarkersongeneandproteinlevels．Theinvivoandinvitrodifferentialpotentialwithinwereintactlypreserved．RT-PCRidentifiedthehighlevelexpressionofLIFandWNT3AinRSFswhichmayaccountfortheexogenousLIF-freemaintainenceo

2、fmESCs．Moreover,thisexogenousLIF-freefeedersystemwasverifiedtobemicrobiologicalquMityassuredbyElectronTransmissionMicroscopy．Fibroblastsandmesenchymalstemcells(MSCs)aremesodermalinstatusandhavebeenisolatedfromvarioustissues．However,unlikefibmblasts，MSCsweredemonstratedtopo

3、ssessbroaddifferentiationcapacities．RecentstudiessuggestedthedifficultydiscriminatingfibroblastsfromMSCsbasedonphenotype(morphologyandspecificproteinmarkers)orgrowthcapacity．Therefore，inthisstudywetriedtoinvestigatethemultipotentialofRSFs．Withclassicinductionparadigm，RSFsm

4、anifestedthemultilineagepotentialofosteoblast、adipocyteandsmoothmusclecell，bothinspecialstainingandgeneexpression．Furthermore，RSFsalsotransdifferentiationintohepatocyteindicatedbyPASstaining．Inconclusion，ourworkdemonstratedthatRSFsmightbeakindofmultifunctionalcelltype．They

5、displayedpowerfulESCmaintenanceandmultipotentialaswell，bothofwhichhaveimportantclinicalimplicationsforcell-basedtherapies．Keywords：EmbryonicstemcellsNeuralprecursorcelltransplantationexogeneousLIF-freefibroblast-likecellsderivedfrOmrabbitspleenmultipotentlal1l1引言第一章文献综述传统的

6、发育生物学使用模式生物作为研究工具，可使我们对母体环境，致畸因素和遗传缺陷对胎儿健康的影响获得深入理解。然而当前科学技术的发展，已经使得发育生物学超越了其描述性医学胚胎学的地位，而成为疾病新疗法开发的有效工具。干细胞生物学可能是当前发育生物学研究领域最有前景也最有争议的学科。事实上，几十年来我们一直在使用异源干细胞(来自骨髓移植物)进行人类血液疾病，特别是白血病的治疗。然而合适的配体很难寻找，同时又必须使用免疫抑制治疗以防止对移植组织的免疫排斥。干细胞疗法的一种思路是获得自体多能性胚胎干细胞(ES)，并在移植前在体外预先分化为特异的细胞类型

7、。建立在这种疗法的基础上，研究者通过联合使用白体Es细胞(来自于体细胞核转移)，体外定向分化Es细胞为造血干细胞及基因治疗，成功的恢复了重症免疫缺陷性小鼠体内的功能性B细胞和T细胞【1】。虽然这种方法是否可用于小鼠其他器官疾病(胰岛，心肌，神经系统)模型还未可知，但无疑这些数据使人振奋。使用这种方法进行人类细胞治疗尚面临许多挑战，为此必须深入我们对于核重编程的基础知识，同时改善与体细胞核移植相关的技术困难及低效问题【2】。关于Es治疗(无论自体还是异体)最关键的问题在于定向分化。过去的几年中，研究人员已经在着手探索Es细胞向多种细胞类型的定

8、向分化。大量的研究表明，改善培养条件或遗传修饰可促进谱系特异性分化，虽然这种分化仍然不稳定(至少尚无法获得大量移植级别的细胞)。此外，分化细胞的表型稳定性(体外或是体内移植后)也