人胚胎干细胞向神经前体细胞诱导分化的研究

《人胚胎干细胞向神经前体细胞诱导分化的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内

2、容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海交通大学硕士研究生毕业论文人胚胎干细胞向神经前体细胞诱导分化的研究中文摘要人胚胎干细胞的研究与人类的健康和医学有着密切的关系，利用胚胎干细胞的多分化潜能对受损和退化的细胞或组织进行修补，有希望为神经系统疾病细胞替代性治疗提供理想的细胞来源，有利于深入研究体外条件下定向诱导胚胎干细胞分化为神经种系细胞的调控机理。本研究包括二方面工作：

3、（一）利用临床体外受精多余的囊胚建立人胚胎干细胞系。用链蛋白酶消化去除囊胚的透明带，然后直接机械分离出内细胞团，接种到小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上，在hES细胞培养液中进行培养，成功建立人胚胎干细胞系并命名为H14；通过对人胚胎干细胞系H14的特征进行鉴定，发现其应具备的干细胞特征：自我更新能力、多向分化潜能和核型正常等。（二）建立人胚胎干细胞系H14之后，我们开展了人胚胎干细胞体外定向诱导分化为神经前体细胞的研究。通过实验比较了bFGF和Noggin两种生长因子对人胚胎干细胞系H14体外诱导分化为神经前体细胞的效率的差异，并利用细胞免疫荧光染色和RT-

4、PCR进行了相关鉴定。结果提示人胚胎干细胞分化所得到的神经前体细胞（hES-NPC）具有神经干细胞（NESTIN+SOX1+）的特征，并且发现100ng/ml的Noggin因子比20ng/ml的bFGF因子在定向诱导人胚胎干细胞分化为神经前体细胞方面具有更高的效率，而且产生的神经花环结构的形态更加饱满，数量更多。本研究结果为进行早期人体神经发育分化机制的研究奠定了基础，也为高效诱导人胚胎干细胞分化为可用于神经性疾病治疗的细胞提供了新思路。关键词：人胚胎干细胞，bFGF，Noggin，神经前体细胞，神经分化I上海交通大学硕士研究生毕业论文NEURALPR

5、ECURSORSDIFFERENTIATIONOFHUMANEMBRYONICSTEMCELLSABSTRACTHumanembryonicstem(hES)cellsareexpectedtobecomeacellsourceforcellreplacementinavarietyofneurodegenerativediseases.InvitroneuraldifferentiationofhEScellsprovidesahelpfulmodeltostudyearlyneuraldevelopmentinhuman,itplaysanimpo

6、rtantroleinhealthyandmedicalcareofhumanbeings.Thecurrentstudyincludesthreeparts.(1)ThenewhumanembryonicstemcellsH14wasestablishedbyinvitrofertilizedblastocystsinclinic.Firstly,thechainproteasewastoremovethezonapellucidaoftheblastulawithdigestioneffect.secondly,theinnercellmasswa

7、sobtainedbymechanicalseparationmethod,whichwascoculturedonthemouseembryonicfibroblastfeederlayerinhEScellculturemedium.ThenstemcellbasicallybiologicalcharacteristicsweremainlyidentifiedbyImmunofluorescencestainingtechnicals,suchasself-renewalcapacity,multi-directionaldifferentia

8、tionpotentialandnormalkaryotype.(2)Afterthehuma