利用体细胞和胚胎干细胞克隆兔的研究

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1、上海交通大学博士学位论文利用体细胞和胚胎干细胞克隆兔的研究姓名：李善刚申请学位级别：博士专业：人体解剖与组织胚胎学指导教师：盛慧珍20060401利用体蛔胞和胚胎干细胞克隆鬼的研究李善刚2006年5月但它们在出生后十天内陆续死亡。另外3只假孕母兔经剖腹产分娩5只小兔，其中3只存活至成年，2只有正常繁殖能力。微卫星分析证明3只克隆兔的遗传物质和供体细胞兔一致。这说明利用经过长时间培养的成纤维细胞能获得有繁殖能力的克隆兔。在利用兔胚胎干细胞进行克隆兔的实验中发现，兔胚胎干细胞不适合直接用于核移植。分化后的胚胎干细胞用于核移植可以显著的提高克隆胚胎的囊胚率。将421枚胚胎千细胞克隆胚胎移

2、植给21只假孕母兔，有2只怀孕到期，生下一只克隆兔，该兔存活至成年，具有授精能力。微卫星检测证明这只兔子和供体胚胎干细胞的遗传物质一致。这说明兔胚胎千细胞经过分化后可以用于克隆兔的制备。关键词：兔，核移植，成纤维细胞，胚胎干细胞，孤雌激活上海炙通大学博士学住论文RABBITSPRoDUCEDFRoMSoMATICANDEMBRYONICSTEM．CELLSBYNUCLEARTRANSFERABSTRACTThetechniqueofsomaticcellnucleartransferanditscombinationwithgenetargetingtechniqueprovide

3、sanewmethodandopportunitiesforgeneticengineeringandgenomepreservationinmammaliananimalspecies．Sincerabbitisoftenusedinlabs，itisalwaysthefocusandtoughproblemthatgetclonedrabbitsfromthelong-termculturedcellline．Inthisstudy，thefirstrabbitsintheworldwereclonedfromskinfibroblastsandthefirstrabbitsw

4、ereclonedfromembryonicstemcells．WefoundthattwotimeselectricpulsessetandchemicalmediumstimulationcanmoreeffectivelyactivatetheMⅡoocytes，comparingwithdifferentactivationconditions．B2mediumissuitabletoculturerabbitparthenogeneticembryos．Thesuitablecultureandpreservationsystemfortherabbitfibroblas

5、tswassetupduringthestudyofculturingtherabbitearskincells加vitro，freezingandthawingthecells．Theseru／]lstarvationcouldn’traisetherateoftheG0／G1stagecellsinthecellcyclethanotherways．NucleartransferembryosderivedfromserulTl—starvedfibroblastsshowedasignificantlyhigherdevelopmentalratethannon—starve

6、dfibroblaststhroughpreimplantationstages．Atotalof467clonedembryosweretransferredintotheoviductsof20pseudo-pregnantmothers．8ofthemcarriedthepregnancytotermand5gavebirthnaturallytoatotalof9rabbits．However,alloftheoffspringdiedatdifferenttimebefore利用体细胞和胚胎干细胞克隆鬼的研究李善刚2006年5月posmatalday10．Caesarea

7、nwasperformedonthethreeothersurrogates，givingbirthtoatotalof5rabbits，3ofthernsurvivedandgrewintoadultsand2ofthemwerefertile．DNAanalysesconfirmedthattheserabbitsweregeneticallyidenticaltothedonorrabbit．ThepresentstudyindicatesthatrabbitC