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《小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提 要:目的 将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,检测HPCs在小鼠脾脏内分化和移植细胞的功能及其在脾脏组织中的整合情况,探讨肝细胞合适的替换治疗细胞来源。方法 体外培养ESC并制备拟胚体(EBs),体外诱导EBs18d后得到HPCs,然后用Hochest3342荧光标记HPCs并制备成6•
2、0×107/ml细胞悬液。移植受体小鼠用2-乙酰氨基芴(2-AAF)处理,移植前受体鼠经过7Gy60Coγ全身辐照和50%肝脏切除,造成小鼠体内对肝细胞的极大需求;然后将0•1ml含6•0×106HPCs细胞悬液经尾静脉注射移植入脾脏,细胞移植4周后,检测移植细胞在小鼠脾脏整合分化情况。结果 体外培养ESC并制备出EBs,EBs经体外诱导为HPCs,并将HPCs移植到小鼠脾脏,4周后观察到移植细胞能够嵌合到受体脾脏组织,在脾脏组织中未形成畸胎瘤,并且移植细胞能表达
3、肝细胞较特异标志物白蛋白、CK19和糖原PAS染色呈阳性反应。结论 本实验建立一种将体外ESC诱导的HPCs移植并整合到脾脏的细胞移植技术,为研究肝细胞分化的分子机制和肝病的细胞替换治疗提供基础。 关键词:胚胎干细胞;脾脏;肝前体细胞;细胞移植;2-乙酰氨基芴 中图法分类号:R322.21;R322.47;R329.2文献标识码:AEngraftedhepaticprecursorcellsinducedfrommouseembryonicstemcellsdifferentiateintofunctionalhe
4、patocytesinratspleenJIANGHai-hong,WANGYu-ming,LIUGuo-dong,CHENYao-kai,LIJun-gang,ZHAOWen-li(InstituteofnfectiousDiseases,SouthwestHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038,China) Abstract:Objective Toinvestigatedifferentiationofmouseembryonicstemc
5、ells(ESC)intohepaticprecursorcells(HPCs)invitroandtransplanttheinducedHPCsintotheratspleen,thentoexploreESCasagraftsourceofhepatocytesinthespleen.Methods MouseESCwereculturedonthefeederlayerofmouseembryonicfibroblasts(MEF)inthemediumcontainingleukemiainhibitoryf
6、actor(LIF),andembryonicbodies(EBs)wereprepared.HPCswereselectivelydifferentiatedatday18inthemediumincludingacid-fibroblastgrowthfactor(acid-FGF),HGF,recombinanthumanoncostatinM(OSM)andITSetal,addedatdifferenttimepointaccordingtodevelopmentalbiologyofliver.Inorde
7、rtotesttheinducedHPCs,albumin(ALB)wasdetectedwithimmunohistochemistrybyfluorescentmicroscope,CK19wasexaminedbyimmunohistochemicalmethodandstainedwithDABstaining,glycogenofdifferentiatedHPCswasobservedwithperiodicacidSchiff’stest(PAS).Transplantedcellswerel
8、abeledbyfluorescencedyeHochest3342.Micewereinjectedwith0.4mg2-acetylaminofluorene(2-AAF)onceaweek.Fourteendaysafterinjection,partialhepatectomy(PHx)(50%)followedradia
