家蝇乙酰胆碱酯酶基因的克隆、突变、表达与应用研究

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1、浙江太学醺士攀住论文摘要乙鼗疆皴酪蘩(acetylcholinestcrasc，AChE，EC3．1。1。7。)整琵交辛霉

2、缝传警串豹一种关键酶，在腿碱能神经突触问，通道催化神经落质己酰魍碱(ace每lcholine，ATCh)来壤持耪经羚韵的摄磐赞遂。AChE是寿裁磷器菱基警酸鹣类募蠢裁爨撵簇罄标。纛手蓉垒勰静丈麓模长麓熬蕊阁，不仅带来巨大懿环境污染，丽营导致诲多耪毙擞对蓉虫粼产生了撬性，嚣魏珊究饕标懿与篆瘫裁瓣互作，遵过突交鬃期来戆选窳虫剂已缝成必一埙缀重要熟鼍程。家褥己蕺耀藏酝酶被获强是捡溅彖擞剂最敏黪的一类撩，传统鲍方法利粥蛊接从家蝇头郏提墩的爨酶液终兔酶源，

3、但麓这稀方法帮存在着一定豹局袋缝，褪酶中禽商诲多予撬经豹蛋爨，後酶的敏感性下降，直接影响了检测的效攀。零研究以家蝇乙酰胆碱酯酶作为研究对象，遥邀设计特异往静弓

4、耱，扩壤得戮家燧豹敏感籁抗往8C8墓嚣，麓对褥挠瞧基豳的1224位碱綦突灏，并将遂三个基闲分别构燕真核表达栽体，转入昆虫细戆遂霉了表达骚究，遴遗夫囊表达缝稼敏感壅豹薅藏耀予瓣霄祝磷稻氯蒸擎酸貉类杀虫帮的稳测。主鼹研究结粜如下：1．将豢蝇敏感菇系鞠莸经鑫系努嗣命名隽SS，；汰，甍隆了敏感家蠛和抗往家建的乙酰躲碱酯酶基圆，通过测序{芷明怒正确的，剃用体外嫩点突变技术将抗往家蝇繇系赘1224整碱蒸f鬻F408Y魏》峦

5、A突变成苫，耱廉魏编碍鹃氮菱簸’由酪爨酸窿成苯荫甄酸。2．将SS，蝴磁6l啪343A彩42{v分粼擒建囊棱袭这载俸，稠蘑Bae-to-Bae释状病毒袭达系统，糯昆虫细胞中表达，袭达臼臼酶疑过SDS-PAGE分析，在上演孛66姻a左纛鸯～条褥吴镶条謦，褥在缨蕤串帮蔻擎没富，遮迄说鞠基瓣的信号歉W以将表遮蛋自分泌鳓胞并。将表达的酶经过亲和层析柱稀检验在66趿斑窍蕈■懿袋警，邈遴一步涯躜了这藏是凌爱翁翳憨蛋妻r蠢桩磷嚣氮基甲黢蘸类黎窳麓瓣3辩重缮AChE静翔销审浓麓(糙如)测定显示V261L／G343A／tM21V突变缆仑AChE辩琴疑杀虫裁懿敏感度奔予拣性象台V26l蜣3

6、43刖飘08WD唾2lV裁敏感AChE之阕，憋与抗楼黠系懿敏慧健福邋箍与敏感菇系却榴麓很远。浙江天学礤毒学位论文3，嚣臻转梁煞sS菇系魏病毒上渍避一多大攫萋感染强鳃魏，裁掰寨黎曩耩黪秀法，缝纯了缓豢自。铡蔫缝纯鳖自检测有梳磷酾氨赫率酸酯娄杀虫帮，鳍鬃表冁，该酶瓣甍基学羧魏囊杀虫燃戆敏感魏要蹇予露壤臻类，瑟最敏感豹还是敌敌提。闷讨寸，我们又检铡了纯化的酶的抑制中浓度和能检测到的杀虫裁的疑低限量，弗与2005年凳布靛《食最孛农药最大残整限量》嚣家标准进行比较，得出该酶对氨基甲酸酯类杀虫剂的敏感性要傀予有机磷炎，毽楚对部分农药最低检擞值还祷特改进。关键运；家褥；乙懿艟簸繇酶

7、：突变；嚣3渤瓣；缝毒

8、：；羧整捡涌2赣江太学硕士学接论文ABSTRACTAcetylcholincsterase(ACHE，EC3．1。1。7)catalyzesthehydrolysisoftheneurotransmitterac埘ylcholine(ATCh)atcholinergicsynapsestokeepthenormalIransmissionofnerveimpulses．Itisthetargetoftheorganophosphateandcarbamatecompounds．TheintensiveIlseofinsecticidehasle

9、dtOthepollutionofenvironmentandmanyinsectshavedevelopedresistance．SoStIIdyingtheinteractionofthetargeteRzymeandinsecticide,screeningouttheinsecticidesthroughmutantproteinhasbecome鑫veryimportantproject．Houseflyacctylcholinesterasewasconsideredtobethemostsensitiveenzymeindetectingpesticid

10、es，andthecrudeellzymewasusedtobetheenzymesources，butthismethodhasmanydefects,such熊thecrudeenzymecontainsmanyotherproteinswhichdisturbtheenzymesensitivity．Inthisresearch,acetylcholinesterasegenewasamplifiedfromthesensitiveandresistanthouseflystrains，the1224sitewasmutated．Theaeet