贝西滑刃线虫乙酰胆碱酯酶2基因克隆与功能研究

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1、万方数据UniversityCode：10225RegisterCode：S14799DissertationfortheDegreeofMasterGeneticCloningandFunctionallmplicationsofanacetylcholinesterase2fromaphelenchoidesbesseyi—Candidate：Supervisor：AssociateSupervisor：AcademicDegreeAppliedfor：Speciality：DateofOralExamination：Un

2、iversity：LiuLihongPro．MaLingMaster’SdegreeForestProtectionJune2014NortheastForestry万方数据摘要l㈣燮贝西滑刃线虫不仅危害印度榕、木槿和非洲紫罗兰等木本植物，还侵染水稻、草莓和玉米等草本植物，防治非常困难，对农林植物危害严重。乙酰胆碱酯酶能够降解乙酰胆碱，终止神经传递对突触后膜兴奋的刺激作用，确保神经信号正常传递。在生物神经传导中起关键性作用。在生物防治中，乙酰胆碱酯酶基因与害虫抗药性有密切关系。为了开发高效低毒防治贝西滑刃线虫的生防制剂，本研究

3、克隆到贝西滑刃线虫乙酰胆碱酯酶2基因，通过原位杂交，发现该基因在贝西滑刃线虫的咽部神经环、肛门神经环和神经干上均有分布。通过植物源农药筛选，根据加入助溶剂的可溶性和杀虫效果，筛选出苦参碱的溶解性和杀虫效果较好。通过RNAi沉默，首先RT-PCR检测该基因已经被沉默；其次对RNAi线虫与正常线虫表型观察，无差别；再次用农药处理RNAi线虫与正常线虫，用农药处理RNAi线虫存活率较低，24h、48h和144h存活率的差异显著，72h、96h、120h、168h和192h差异极显著，216h差异不显著，正常线虫和RNAi线虫用水处理

4、，存活率差异不显著；最后证实该基因沉默后对线虫的繁殖力没有影响。说明该基因RNAi沉默后能够提高了苦参碱的杀虫效果，同时由于RNAi技术难以应用于贝西滑刃线虫防治生产实践，本研究提出通过乙酰胆碱酯酶抑制剂作为辅剂提高苦参碱的杀虫效果。结果表明，该基因具有生物防治潜力。关键词贝西滑刃线虫乙酰胆碱酯酶2基因克隆原位杂交RNA干扰万方数据Abstract彳p^Plenchoidesbesseyi，whichispolyphagousandcausesdamagetoFicuselastica，Hibiscussyriacus．Sai

5、ntpauliaionantha．Moreover,A．besseyialsocausesdamagetoOryzas口tiva，Zeamays，Fragariagrandiflora，preventionandcureisverydifficult·Acetylcholinesterasebeabletodegradetheacetylcholine，terminateneurotransmitterfunctionof也epostsynapticmembraneexcitementofstimulation，toensur

6、ethenormalneuralsignaltran岛∞jssion．Itplaysakeyroleinthebiologicalnerveconduction．Inbiologicalcontrol，acet，rlcholineesterasegenehascloserelationshipwithpestresistance．WeareinordertodevelopA．besseyibiologicalcontrolagentsofhighefficiencyandlowtoxicity．AA．besseyiAb-ACE

7、．2gene，Ab-ACE-2，werefoundandwellstudied．Ab-ACE-2isdistributedpharyngealnervering．analnerveringandnervetrunkofA．besseyibyinsituhybridization．Throughthebotanicalpesticidescreening，accordingtojointhelatentsolventsolubleandinsecticidaleffect，selectthesolubilityandinsect

8、icidaleffectofmatrineisbetter．ByRNAisilence，first，RT-PCRdetectthatthegenehasbeensilent；second，phenotypicobservationofRNAinematodesisthesal