菊花滑刃线虫快速分子检测

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1、江西农业大学学报2010，32(4):0714－0717http://xuebao．jxau．edu．cnActaAgriculturaeUniversitatisJiangxiensisE－mail:ndxb7775@sina．com菊花滑刃线虫快速分子检测1，222崔汝强，赵立荣，钟国强(1．江西农业大学农学院，江西南昌330045;2．广东检验检疫技术中心，广东广州510623)摘要:根据菊花滑刃线虫(Aphelenchoidesritzemabosi)和相近滑刃线虫种群的rDNA－ITS序列，设计出菊花滑刃线虫特异性引物，

2、利用PCR技术对菊花滑刃线虫包含部分5．8S基因和部分rDNA－ITS2核苷酸序列进行扩增，获得208bp的特异性片段。实现了单条活的或FG(4%的甲醛)固定的菊花滑刃线虫的快速检测。关键词:菊花滑刃线虫;检测;rDNA－ITS中图分类号:S41－30文献标志码:A文章编号:1000－2286(2010)04－0714－04ARapidMethodtoDetectAphelenchoidesritzemabosibyPCR1，222CUIRu-qiang，ZHAOLi-rong，ZHONGGuo-qiang(1．Collegeof

3、Agronomy，JAU，Nanchang330045，China;2．GuangdongExit－EntryInspectionandQuarantineBureau，Guangzhou510623，China)Abstract:Apolymerasechainreaction(PCR)wasusedtoamplifypartialribosomalDNAcontaining5．8Sgeneandpartialinternaltranscribedspacerregion2(ITS2)．Accordingtothediffere

4、ncebetweenthese-quencesofinternaltranscribedspacerregion(ITS)ofAphelenchoidesritzemabosi，A．besseyiandthatofA．fragariae，specificprimersweredesignedrespectivelyforA．ritzemabosi．Theprimersamplifiedafragmentofabout208bp．Asinglenematode，livingorpreservedinformalin，couldbed

5、etectedrapidly，andA．ritzema-bosiwasdistinguishedaswell．Thismethodwouldbeusefulforrapiddetectionofnematodes．Keywords:Aphelenchoidesritzemabosi;detection;rDNA－ITS菊花滑刃线虫(Aphelenchoidesritzemabosi)通常又被称为菊花叶枯线虫或腋芽滑刃线虫。其寄主范围非常广，能寄生观赏植物、蔬菜、小果类植物和杂草等200多种植物，菊花(Dendranthemamor

6、ifolium)是其典型寄主，其他重要的寄主有大丽花、福禄考、金丝桃、绣线菊、秋海棠、大岩桐、薄包花、秋海棠、黑［1－2］树营、草毒、烟草、西瓜、莴苣、番茄、芹菜等。在全球广泛分布，在全世界已有70多个国家或地区发现此病害;是菊花的重要病害，病害发生导致经济价值降低，严重的导致死亡;为害草莓造成减产，严重［3］［4］时损失可达65%，在法国曾严重为害烟草，造成烟叶产量及品质严重下降。许多国家和地区对菊花滑刃线虫有检疫要求，我国2006年也将其列入检疫名录中。目前滑刃属线［5］虫除草莓滑刃线虫有快速检测方法以外，其他种类依然靠传统的

7、形态学检测，具有费时、幼虫无法鉴定等缺点。因此，应检疫工作的需要，发展快速准确鉴定、检测技术成为必然。本研究的主要目的是为菊花滑刃线虫鉴定提供一种快速、高效、灵敏的分子检测方法。1材料与方法1．1供试线虫本实验测试了不同地区的3个菊花滑刃线虫种群及近年来广东口岸截获的星状尾组群的滑刃线收稿日期:2010－05－04修回日期:2010－06－23基金项目:科技部支撑项目(2006BAD08A16)和广东省科技计划项目(2007B020709006)作者简介:崔汝强(1978－)，男，博士，主要从事植物病原线虫和细菌学研究，Email

8、:cuiruqiang@sohu．com。第4期崔汝强等:菊花滑刃线虫快速分子检测·715·虫:水稻干尖线虫(A．besseyi)、古德伊滑刃线虫(A．goodeyi)、滑刃线虫种群1(AphelenchoidesspUS03)、滑刃线虫种群2(A