降钙素基因相关肽通过抑制nod样受体蛋白3表达促进小鼠成骨细胞分化的研究

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1、华西口腔医学杂志第34 卷第 1 期2016 年 2 月•2•WestChinaJournalofStomatologyVol.34No.1Feb.2016http://www.hxkqyxzz.net降钙素基因相关肽通过抑制Nod样受体蛋白3表达促进小鼠成骨细胞分化的研究蔡俊吕俊李适庭高强国张纲第三军医大学附属新桥医院口腔颌面外科，重庆400037[摘要]目的研究降钙素基因相关肽（CGRP）作用下相关炎症体和信号因子的表达变化，探讨CGRP对成骨细胞分化的作用机制。方法将不同浓度的CGRP（0、10、30、100ng·mL-1）加入到成骨细胞中，采用实时聚合酶链反应

2、技术检测细胞内Nod样受体蛋白3（NLRP3）及白细胞介素-1β（IL-1β）mRNA的表达水平，蛋白质印迹法检测NLRP3的蛋白表达，酶联免疫吸附测定检测IL-1β的蛋白表达，流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）含量，茜素红染色显示成骨细胞分化情况。结果随着CGRP浓度的增加，NLRP3和IL-1β的蛋白表达及mRNA表达均呈降低趋势（P<0.05），而且细胞内ROS浓度逐渐下降（P<0.05）。100ng·mL-1CGRP实验组较0ng·mL-1CGRP对照组显著促进成骨细胞分化。结论CGRP在一定条件下，可通过抑制细胞内炎症因子的表达促进成骨细胞分化。[关键词]降

3、钙素基因相关肽；Nod样受体蛋白3；白介素1-β；活性氧；成骨细胞[中图分类号]Q254[文献标志码]A[doi]10.7518/hxkq.2016.01.003Calcitoningene-relatedpeptideinhibitstheexpressionofNod-likereceptorprotein3topromoteosteoblastdifferen-tiationinmouseosteoblastsinvitroCaiJun,LüJun,LiShiting,GaoQiangguo,ZhangGang.(Dept.ofOralandMaxillo-fac

4、ialSurgery,XinqiaoHospital,TheThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400037,China)Supportedby:TheNationalNaturalScienceFoundationofChina(8277098).Correspondence:ZhangGang,E-mail:xqyykqk@63.com.[Abstract]ObjectiveThisstudyaimstoinvestigatetheregulatoryeffectsofcalcitoningene-relatedpep

5、tide(CGRP)onNod-likereceptorprotein3(NLRP3)andinterleukin-1β(IL-1β)topromoteosteoblastdifferentiation.MethodsDifferentconcentrationsofCGRP(0,10,30,100ng·mL-1)wereaddedtomouseosteoblastsinvitro.ThemRNAandproteinex-pressionlevelsofbothNLRP3andIL-1βwereexaminedusingReal-timepolymerasechainr

6、eactionandWesternblot,respec-tively.Moreover,theconcentrationsofIL-1βproteinandintracellularreactiveoxygenspecies(ROS)weredetectedusingenzyme-linkedimmunosorbentassayandflowcytometry,respectively.Theosteogenicdifferentiationofmouseosteoblastswasidentifiedthroughalizarinredstaining.Result

7、sTheproteinandmRNAexpressionlevelsofbothNLRP3andIL-1βsignificantlydecreased(P<0.05)withincreasingCGRPconcentration.Moreover,thecontentsofintracellularROSgraduallydecreased(P<0.05).Theosteogenicdifferentiationoftheosteoblastswasmoreenhancedinthegrouptreatedwith100ng·mL-1CG