非甾体抗炎药抑制成骨细胞增生和分化研究

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1、分类号：R393.9学校代码：10392学科专业代码：100201学号：2121003028硕士学位论文非甾体抗炎药抑制成骨细胞增生和分化研究Non-steroidalanti-inflammatorydrugsinhibitosteoblastsproliferationanddifferentiation学位类型：医学硕士所在学院：第一临床医学院申请人姓名：曾小玲学科、专业：内科学（风湿病学）导师：陈君敏教授研究起止日期：2013年9月至2015年3月答辩委员会主席：郑祥雄教授答辩日期：2015年6月4日二○一五年六月目录英文缩略词表……………………………

2、……………………………..……………….…….…….1中文摘要……………………………………………………………………………………….……….2英文摘要………………………………………………………………………………………….…….4引言……………………………………………………………………………………………….……….6材料和方法…………………………………...…………………………………………….….……..8结果…………………………..…………………………………………………………..………………15讨论………………………………………………………………………………..

3、…………….……….26结论…………………………………………………………………………………..………….……….28参考文献……………………………………………………………………………..……….……….29综述……………………………………….………....…………………………………………………..31致谢……………………………………….………....…………………………………………………..35英文缩略词表英文缩写英文全称中文全称ALPalkalinephosphatase碱性磷酸酶BMP2bonemorphogeneticprotein2骨形态发生蛋白2bF

4、GFbasicfibroblastgrowthfactor碱性成纤维细胞生长因子BMSCsbonemarrowmesenchymalstemcells骨髓间充质干细胞CCK-8cellcountingkit-8细胞计数试剂盒Cbfa1core-bindingfactora1核心蛋白结合因子DMSOdimethylsulphoxide二甲基亚砜DEPCdiethylpyrocarbonate焦炭酸二乙酯FBSfetalbovineserum胎牛血清GAPDHglyceraldehyde-3-phosphate3-磷酸甘油醛脱氢酶dehydrogenaseLRP5

5、/6lowdensitylipoproteinreceptorrelated低密度脂蛋白受体相关蛋白protein5/65和6L-DMEMlowglucose-Dulbecco'smodifiedEagle低糖改良杜氏伊格尔培养基mediummSASSSmodifiedStokesASspinalscore改良Stoke强直性脊柱炎脊柱评分NSAIDsnon-steroidalanti-inflammatorydurgs非甾体类抗炎药OBosteoblast成骨细胞PGE2prostaglandinE2前列腺素E2TCF/LEFTcellfactor/lymp

6、hoidenhancingfactorT细胞因子/淋巴样增强因子1非甾体抗炎药抑制成骨细胞增生和分化研究摘要目的探讨非甾体类抗炎药（non-steroidalanti-inflammatorydurgs,NSAIDs）在成骨细胞诱导分化过程中的作用，并探讨经典Wnt信号通路在其中的作用机制。方法（1）采用Ficoll密度梯度离心法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs)，并进行传代。（2）取传至3-5代的大鼠骨髓间充质干细胞，加入含地塞米松（10-8mol/L）、β-甘油磷酸钠（10-2mol

7、/L）、维生素C（0.05g/L）等试剂的L-DMEM条件培养液诱导分化为成骨细胞，在细胞增殖和分化的过程中，分别加入不同浓度的双氯芬酸钠或塞来昔布（每组n=5）。（3）采用CCK-8试剂盒测定双氯芬酸钠或塞来昔布对BMSCs增殖活性的影响。（4）碱性磷酸酶（alkalinephosphatase,ALP）染色分析双氯芬酸钠对BMSCs向成骨细胞诱导分化过程中ALP表达的影响，钙盐染色分析塞来昔布对BMSCs向成骨细胞诱导分化过程中钙盐沉积的影响，使用ImageProPlus6.0软件分析，计算IODsum/Areasum值。（5）通过RT-PCR检测塞来昔布

8、对成骨细胞关键转录因子RUNX2mRN