原硅酸通过bmp-2smadrunx2信号通路促进成骨细胞分化的机制研究

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1、CoNTENTSAbstractinChinese．．1AbstractinEnglish4Symbolicdescription．．7Preface9PartITheroleofincreasedexpressionofBMP一2inpromotingratBMSCstoosteogenicdifferentiation16MaterialsandMethods16Results．．25Discussion27Conclusion28Figures．．29PartIIOrthosilicicacidpromotesCOL-1andosteocalcinsynthesisthroug

2、htheBMP．2／Smadl／5／RUNX2signalingpathway．．32MaterialsandMethods．．32Results．．42Discussion44Conelusion46Figures”47References51Acknowledgements．·53ArticleSPublished54万方数据山东大学硕士学位论文原硅酸通过BMP．2／Smad瓜UN)【2信号通路促进成骨细胞分化的机制研究专业：外科学(骨外科)研究生：董盟导师：陈允震教授中文摘要目的1．探讨原硅酸(orthosilicicacid)是否通过上调骨形态发生蛋2(bonemorphog

3、eneticprotein2，BMP一2)的表达来促进大鼠骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs)向成骨细胞分化。2朋确原硅酸是否通过BMP-2／Smadl／5瓜I小IX2信号通路促进成骨细胞表达一型胶原(collagentypel，COL．1)和骨钙素。方法分别向大鼠BMSCs中加入不同浓度(0、5、lO、20、500M)的原硅酸，作用48h后，Westernblot法检测BMP．2的表达；向大鼠BMSCs中加入浓度为10Ⅲvl的原硅酸，分别作用不同的时间(0、24、48、72h)后，Westernblot法检测BMP．2的表达；

4、使用BMP．2拮抗剂noggin预先处理细胞2h，Westernblot法检测BMP．2的表达：分别向大鼠BMSCs中加入不同浓度(0、5、lO、20、50州)的原硅酸，作用72h后，Westernblot法检测COL．1的表达；向大鼠BMSCs中加入浓度为100M的原硅酸，分别作用不同的时间(0、48、72、96h)后，Westernblot法检测COL．1的表达；向大鼠BMSCs中加入不同浓度(0、5、10、20、50州)的原硅酸作用7d后，以及使用noggin预先处理细胞2h后，均用微量酶标法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)的活性：向大鼠BMSCs中分别加入不同浓度(0、10州)的

5、原硅酸作用21d后，细胞茜素红钙染色法检测钙结节的万方数据山东大学硕士学位论文生成量；分别向人成骨肉瘤细胞MG．63和U2．OS细胞系中加入不同浓度(O、lO、20、50州)的原硅酸，作用72h后，Westernblot法检测COL．1、骨钙素及BMP．2／Smad／RUNX2信号通路相关蛋白的表达。使用noggin预先处理细胞2h，Westernblot法检测BMP．2、P．Smadl／5和RUNX2的表达；在MG．63细胞系中加入不同浓度(0、101aM)原硅酸，细胞免疫荧光法检测BMP．2、P．Smadl／5和RUNX2。微量酶标法检测不同浓度(O、10、20、50洲)原硅酸对

6、MG．63细胞内ALP活性的影响。结果BMSCs分别经0、5、10、20、50rtM原硅酸处理48h，50M原硅酸开始使BMP．2表达增多，浓度为10州时，BMP．2表达水平最高，与对照组相比，差异有统计学差异(P0．05)；经10州原硅酸分别处理BMSCs24h、48h后，与对照组相比，细胞内BMP．2的表达较对照组均增加(P<0．05)，其中48h时，BMP．2的表达水平最高。处理72h时，BMP．2表达水平下降并接近于对照组水平(P>O．05)；使用BMP-2的拮抗剂noggin(

7、100ng／m1)预先处理BMSCs2h后，可以显著阻断原硅酸对BMP．2表达的上调作用；BMSCs分别经0、5、10、20、50gM原硅酸处理72h后，与对照组相比，COL．1的表达均明显增高(P<0．05)，其中浓度为10gM时，COL．1的表达水平最高，浓度为50洲时，COL．1表达水平下降并接近于对照组水平(P>0．05)；经100M原硅酸分别处理BMSCs48h、72h、96h后，与对照组相比，COL．1表达明显升高(P<0．05)。其中处理72