蛋白质精氨酸甲基转移酶5对人卵巢癌ho8910细胞

《蛋白质精氨酸甲基转移酶5对人卵巢癌ho8910细胞》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、医学研究生学报２０１８年６月第３１卷第６期ＪＭｅｄＰｏｓｔｇｒａ，Ｖｏｌ．３１，Ｎｏ．６，Ｊｕｎｅ，２０１８·５６５·论著（基础研究）蛋白质精氨酸甲基转移酶５对人卵巢癌ＨＯ８９１０细胞增殖能力的影响魏野，王冉冉，韩田田，赵康荣，林琼，邵根宝［摘要］目的蛋白质精氨酸甲基转移酶５（ＰＲＭＴ５）可通过表观遗传或翻译后甲基化修饰的方式参与众多的生物学调控。文中旨在探讨ＰＲＭＴ５对卵巢癌ＨＯ８９１０细胞增殖能力的影响。方法利用瞬时转染的方法获得ＰＲＭＴ５过表达的ＨＯ８９１０细胞株，分为空白对照组（野生型ＨＯ８

2、９１０细胞株）、阴性对照组（转染ｐＣＭＶ⁃ｍｙｃ质粒的ＨＯ８９１０细胞）、实验组（转染ｐＣＭＶ⁃ｍｙｃ⁃ＰＲＭＴ５质粒的ＨＯ８９１０细胞）。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测３组细胞标签蛋白ｍｙｃ的表达，ｑＲＴ⁃ＰＣＲ检测３组细胞ＰＲＭＴ５ｍＲＮＡ的表达。另利用ｓｈＲＮＡ干扰方法建立诱导型稳定敲低ＰＲＭＴ５基因的ＨＯ８９１０细胞株，分为ｐＬＫＯ对照组（感染空载体慢病毒）、ｐＬＫＯ＋Ｄｏｘ（１００ｎｇ／ｍＬ）组、ｓｈＰＲＭＴ５组（感染ＰＲＭＴ５⁃ｓｈＲＮＡ慢病毒组）和ｓｈＰＲＭＴ５＋Ｄｏｘ（１００ｎｇ／ｍＬ）

3、组。用不同浓度梯度的Ｄｏｘ诱导敲低（Ｄｏｘ０ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ）４８ｈ，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、ｑＲＴ⁃ＰＣＲ检测ＰＲＭＴ５的蛋白和ｍＲＮＡ的表达。克隆形成实验、ＥｄＵ实验、ＣＣＫ⁃８实验检测细胞增殖能力；实验细胞分为Ｄｏｘ⁃组、Ｄｏｘ＋组、ｐＣＭＶ⁃ｍｙｃ组、ｐＣＭＶ⁃ｍｙｃ⁃ＰＲＭＴ５组。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测细胞ＰＲＭＴ５的表达对增殖相关蛋白的影响。结果Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示，空白对照组和阴性对照组均无标签蛋白ｍｙｃ的表达，而实验组检测到ｍｙ

4、ｃ的表达，ｑＲＴ⁃ＰＣＲ检测实验组ＰＲＭＴ５ｍＲＮＡ表达远高于空白对照组和阴性对照组（Ｐ＜０．０１）。与ｐＬＫＯ对照组细胞中ＰＲＭＴ５的蛋白表达水平（１．０５±０．１１）比较，ｓｈＰＲＭＴ５＋Ｄｏｘ组（０．３２±０．２５）和ｓｈＰＲＭＴ５组ＰＲＭＴ５的蛋白表达（０．８９±０．１８）显著减少（Ｐ＜０．０５）。ｑＲＴ⁃ＰＣＲ结果同样显示，ｓｈＰＲＭＴ５＋Ｄｏｘ较ｓｈＰＲＭＴ５组ＰＲＭＴ５ｍＲＮＡ表达显著降低（Ｐ＜０．０１）。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和ｑＲＴ⁃ＰＣＲ证实ＰＲＭＴ５在用Ｄｏｘ１０ｎｇ／ｍＬ（０

5、．２１±０．２４）和１００ｎｇ／ｍＬ（０．０８±０．１５）诱导后相较于无Ｄｏｘ处理显著下调（Ｐ＜０．０５）。Ｄｏｘ⁃组细胞形成的克隆数［（１６１±１５）个］显著高于Ｄｏｘ＋组细胞克隆数［（７３±８）个］，差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。ｐＣＭＶ⁃ｍｙｃ⁃ＰＲＭＴ５组克隆数［（１９３±１５）个］明显高于ｐＣＭＶ⁃ｍｙｃ组克隆数［（１０２±１２）个］，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。Ｄｏｘ⁃组正在进行ＤＮＡ复制的细胞数［（３５±１０）个］明显高于Ｄｏｘ＋组［（１６±８）个］，差异具有统计学意义（Ｐ

6、＜０．０５）。ｐＣＭＶ⁃ｍｙｃ⁃ＰＲＭＴ５组正在进行ＤＮＡ复制的细胞数［（４６±８）个］显著高于ｐＣＭＶ⁃ｍｙｃ组［（２４±８）个］，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。ＣＣＫ⁃８结果显示，细胞铺板第４天以后Ｄｏｘ＋组细胞增殖率显著低于Ｄｏｘ⁃组（Ｐ＜０．０５）。ｐＣＭＶ⁃ｍｙｃ⁃ＰＲＭＴ５组细胞的增殖率从第４天也显著高于对应天数的ｐＣＭＶ⁃ｍｙｃ组（Ｐ＜０．０５）。结论ＰＲＭＴ５对卵巢癌细胞的增殖能力有重要作用。下调ＰＲＭＴ５可以抑制细胞的增殖能力，而上调ＰＲＭＴ５促进细胞的增殖能力。［关键词］蛋白

7、质精氨酸甲基转移酶５；卵巢癌；增殖［中图分类号］Ｒ７３７．３１［文献标志码］Ａ［文章编号］１００８⁃８１９９（２０１８）０６⁃０５６５⁃０８［ＤＯＩ］１０．１６５７１／ｊ．ｃｎｋｉ．１００８⁃８１９９．２０１８．０６．００２ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＰＲＭＴ５ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｎｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｏｖａｒｉａｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｌＨＯ８９１０ＷＥＩＹｅ，ＷＡＮＧＲａｎ⁃ｒａｎ，ＨＡＮＴｉａｎ⁃ｔｉａｎ，ＺＨＡＯＫａｎｇ⁃ｒｏｎｇ，ＬＩＮＱｉｏｎｇ，ＳＨＡＯＧｅｎ⁃ｂａｏ（Ｓｃｈｏｏｌ

8、ｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＪｉａｎｇｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ２１２０１３，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ）基金项目：国家自然科学基金（８１１７０５７３）［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＰｒｏｔｅｉｎａｒｇｉｎｉｎｅｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ５作者单位：２１２０１３镇江，江苏大学医学院［魏野（医学硕（ＰＲＭＴ５），ａｍｅｍｂｅｒｏｆｔｈｅｈｉｓｔｏｎｅａｒｇｉｎｉｎｅｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ士研究生）、王冉冉、韩田田、赵康荣