细胞因子诱导小鼠骨髓间充质干细胞跨越分化肝细胞的研究

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1、万方数据·728·生堡壁墅丛壁盘查!!!!笙!!旦笙!!鲞箜!!塑g!垫』望!塑!!鲤堕!z塾!g：Q!!!!竺垫!!!!!!：!!!盟!：!!细胞因子诱导小鼠骨髓间充质干细胞跨越分化肝细胞的研究董学君陈烨邵健忠张国荣项黎新●【摘要】目的探索骨髓问充质干细胞(MSCs)体外跨越分化为肝细胞的诱导体系。方法从单核细胞中分离间充质干细胞，用添加20ng／mlHGF、10ng／mlFGF-4、10ng／mlOSM和10％NBS的IMDM培养液诱导间充质干细胞向肝细胞分化。结果经细胞因子诱导的细胞出现肝细胞样变化，随诱导时间延长体积逐

2、渐增大、形态往上皮样转变，胞浆丰富，出现双核或多核细胞。RT—PCR和免疫荧光检测结果显示，AFP在诱导初期表达，在诱导后期表达下降；CKl8、ALB和TAT的表达与诱导时间呈线性关系。第20天达到表达高峰；诱导20d后免疫荧光检测，AFP、CKl8、ALB和TAT均为阳性；诱导20d细胞的PAS糖原合成反应呈阳性，即具备糖原合成和储存的肝细胞特有功能。结论HGF、FGF-4和OSM三种细胞因子组合，可诱导小鼠问充质干细胞向肝细胞分化，该结果为间充质干细胞跨越分化肝细胞的分子机制探讨和临床应用打下了基础。【关键词】间充质干细胞

3、；肝细胞；分化；肝细胞生长因子{成纤维细胞生长因子一4；制瘤素Trans-differentiationofhepatocytesfrommOllSebonemarrowmesenchymaIstemcelIsinducedbycombi-nationofcytokinesDONGXue-jUrl’，cHENYe，sHAoJian—zhong，etal．’Shaoxingpeople’sHos-pital，Shaoxing312000，P．R．China[Abstract]0bjectiveToestablishaneffec

4、tivemethodforinducingmousebonemarrowmesen—chymalstemcells(MSCs)intohepatocytes．MethodsIsolatedMSCswereselectedbyplasticadher—ence，differentiatedinIscove7SModifiedDulbeceo’smediumsupplementedwith10％newbovineser—um(NBS)，20ng／mLhepatocytegrowthfactor(HGF)，10ng／mLfibrob

5、lastgrowthfactor-4(FGF二4)and10ng／mloncostatinm(OSM)for20days’induction．Themediumwaschangedevery4days．ResultsWhenMSCswereculturedwithHGF，FGF-4andOSM，euboidalmorphology，whichwasacharacteristicofhepatocytes，wasobserved，andthedifferentiatedceilsalsoexpressedmarkergeness

6、pecifictolivercellsinatime-dependentmanner．a-fetoprotein(AFP)wasexpressedonday10。andCKl8，ALBandTATweredetectedonday20。whichwasinconsistentwiththeimmunofluoresenceresults．Differentiatedcellsfurtherdemonstratedthesecellsalsoacquiredfunctionalcharacteristicsofhepatocyt

7、esofstoringglycogen．ConclusionMouseMSCscandifferentiateintohepatocyteswhenin-ducedbyHGF，FGF-4andOSM．[Keywords]Mesenchymalstemcell；HepatoeytetDifferentiation；HGF；FGF-4；0SM已有研究显示，骨髓单个核细胞可跨越分化为多种不同胚层来源的细胞，如神经细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、上皮细胞和胰岛细胞等[1嵋1；该研究小组曾利用肝细胞生长因子(hepatocytegrowth

8、fac—tor，HGF)、成纤维细胞生长因子一4(fibroblastgrowthfactor一4，FGF-4)和制瘤素(OncostatinM，OSM)的组合体系，成功地诱导骨髓单个核细胞跨项金项目；绍兴市科技计划项目(2005141)作者单位：312000绍兴市人民医院医