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《人胎儿骨髓间充质干细胞体外向类肝细胞诱导分化条件的优化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、人胎儿骨髓间充质干细胞体外向类肝细胞诱导分化条件的优化【关键词】,骨髓间充质干细胞 【Abstract】AIM:Toestablishandoptimizetheinductionanddifferentiationconditionforhumanfetalmarroesenchymalstemcell(MMSCs)differentiationintohepatocytelikecells,observethedifferentiationprocedureandidentifythephenotypesofMM
2、SCs.METHODS:MMSCs,isolatedfromfetalmarroarkerssuchasALBandCK18easuredmunohistochemistry.RESULTS:Cellsincontrolgroupkeptthelongspindleshape,allsize,proliferatedquickly,submittedtypicalfibroblastboyancygroountofgranulesincreased,andthereon.Cellsatrixkeptlongspindl
3、eshapegroatrixchangedfromlongtoroundinshapeandshapeagentreduced.AZApretreatmentinhibitedthecellhyperplasia,andcellchangedfromlongtoshortinshape.PDGFBBpretreatmenthadnoinhibitiontocellproliferation,andcellsbranchedeasily.Immunohistochemicalstaininginalltheinducti
4、ongroupsshoculturecondition,highratiohepatocytelikecellsininducedMMSCscanbeobtainedbytheconditionofinductiongroup4:inatrix,MMSCsarepretreatedmol/LAZAfor10-12h,andHGF10μg/L＋FGF410μg/L,usedaspromoters,areaddedintoHGMmedium. 【Keyarroesenchymalstemcells;hepatocytel
5、ikecells;celldifferentiation;induction 【摘要】目的：建立和优化骨髓间充质干细胞(marroesenchymalstemcells,MMSCs)向类肝细胞诱导分化的条件及分化过程观察、鉴定.方法：采用体外分离培养的MMSCs为研究对象，设计不同的诱导分化条件进行体外诱导，观察细胞诱导分化过程中形态结构变化及细胞生物学特性，应用免疫组化检测肝细胞标志ALB和CK18的表达，建立人胎儿MMSCs向类肝细胞分化的优化条件.结果：未进行诱导的对照组细胞保持长梭型，形状因子4.5±1.0，
6、面积较小，增生较快，呈典型成纤维细胞的漩涡状或火焰状生长，培养后期可见5~7个分支，无细胞变圆，双核细胞率小于0.1%，逐渐老化，颗粒增多.组化染色未见表达ALB和CK18.所有诱导组细胞在培养中细胞分支均减少，多为1~3个分支，未用基质的细胞仍保持长梭形生长，给予基质的诱导细胞部分形态由长变圆，形状因子下降，给予5氮胞苷（5azacitidine,AZA）预处理可抑制细胞过度增生，细胞形态由长梭型逐渐变短，PDGFBB预处理对细胞增生无明显抑制作用，细胞容易出现分支.诱导各组组化染色显示，第21日时均有ALB和CK1
7、8阳性表达.诱导2组～诱导5组的细胞转圆率、双核细胞比率及ALB，CK18阳性细胞比例均显著高于对照组及诱导1组(P<0.05).结论：在无血清培养条件下，按诱导4组的方案10g/LMatrigel作基质，2.5mmol/LAZA预处理10～12h，HGF10μg/L＋FGF410μg/L+HGM培养基可获得高比例的类肝细胞. 【关键词】骨髓间充质干细胞；类肝细胞；细胞分化；诱导 0引言 骨髓间充质干细胞(MMSCs)是能分化为不同细胞和组织类型的多潜能细胞，是细胞移植的理想.最近研究发现体内移植骨髓细胞可
8、发育为肝细胞［1-5］.因此，骨髓细胞有治疗急慢性肝功能衰竭的潜能.我们采用体外培养的人胎儿MMSCs为研究对象，设计不同的诱导分化条件进行体外诱导，观察细胞诱导分化过程中形态结构变化及细胞生物学特性，应用免疫组化检测肝细胞标志的表达，以建立人胎儿MMSCs向类肝细胞诱导分化的优化条件. 1材料和方法 1.1材料 采用体外细
