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《人胎儿骨髓间充质干细胞体外向类肝细胞诱导分化条件的优化》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、人胎儿骨髓间充质干细胞体外向类肝细胞诱导分化条件的优化【关键词】,骨髓间充质干细胞 【Abstract】AIM:Toestablishandoptimizetheinductionanddifferentiationconditionforhumanfetalmarroesenchymalstemcell(MMSCs)differentiationintohepatocytelikecells,observethedifferentiationprocedureandidentifythephenotypesofMM
2、SCs.METHODS:MMSCs,isolatedfromfetalmarroarkerssuchasALBandCK18easuredmunohistochemistry.RESULTS:Cellsincontrolgroupkeptthelongspindleshape,allsize,proliferatedquickly,submittedtypicalfibroblastboyancygroountofgranulesincreased,andthereon.Cellsatrixkeptlongspindl
3、eshapegroatrixchangedfromlongtoroundinshapeandshapeagentreduced.AZApretreatmentinhibitedthecellhyperplasia,andcellchangedfromlongtoshortinshape.PDGFBBpretreatmenthadnoinhibitiontocellproliferation,andcellsbranchedeasily.Immunohistochemicalstaininginalltheinducti
4、ongroupsshoculturecondition,highratiohepatocytelikecellsininducedMMSCscanbeobtainedbytheconditionofinductiongroup4:inatrix,MMSCsarepretreatedmol/LAZAfor10-12h,andHGF10μg/L+FGF410μg/L,usedaspromoters,areaddedintoHGMmedium. 【Keyarroesenchymalstemcells;hepatocytel
5、ikecells;celldifferentiation;induction 【摘要】目的:建立和优化骨髓间充质干细胞(marroesenchymalstemcells,MMSCs)向类肝细胞诱导分化的条件及分化过程观察、鉴定.方法:采用体外分离培养的MMSCs为研究对象,设计不同的诱导分化条件进行体外诱导,观察细胞诱导分化过程中形态结构变化及细胞生物学特性,应用免疫组化检测肝细胞标志ALB和CK18的表达,建立人胎儿MMSCs向类肝细胞分化的优化条件.结果:未进行诱导的对照组细胞保持长梭型,形状因子4.5±1.0,
6、面积较小,增生较快,呈典型成纤维细胞的漩涡状或火焰状生长,培养后期可见5~7个分支,无细胞变圆,双核细胞率小于0.1%,逐渐老化,颗粒增多.组化染色未见表达ALB和CK18.所有诱导组细胞在培养中细胞分支均减少,多为1~3个分支,未用基质的细胞仍保持长梭形生长,给予基质的诱导细胞部分形态由长变圆,形状因子下降,给予5氮胞苷(5azacitidine,AZA)预处理可抑制细胞过度增生,细胞形态由长梭型逐渐变短,PDGFBB预处理对细胞增生无明显抑制作用,细胞容易出现分支.诱导各组组化染色显示,第21日时均有ALB和CK1
7、8阳性表达.诱导2组~诱导5组的细胞转圆率、双核细胞比率及ALB,CK18阳性细胞比例均显著高于对照组及诱导1组(P<0.05).结论:在无血清培养条件下,按诱导4组的方案10g/LMatrigel作基质,2.5mmol/LAZA预处理10~12h,HGF10μg/L+FGF410μg/L+HGM培养基可获得高比例的类肝细胞. 【关键词】骨髓间充质干细胞;类肝细胞;细胞分化;诱导 0引言 骨髓间充质干细胞(MMSCs)是能分化为不同细胞和组织类型的多潜能细胞,是细胞移植的理想.最近研究发现体内移植骨髓细胞可
8、发育为肝细胞[1-5].因此,骨髓细胞有治疗急慢性肝功能衰竭的潜能.我们采用体外培养的人胎儿MMSCs为研究对象,设计不同的诱导分化条件进行体外诱导,观察细胞诱导分化过程中形态结构变化及细胞生物学特性,应用免疫组化检测肝细胞标志的表达,以建立人胎儿MMSCs向类肝细胞诱导分化的优化条件. 1材料和方法 1.1材料 采用体外细