microrna3303p预测非小细胞肺癌脑转移发生的机制研究

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1、华中科技大学硕士学位论文microRNA-330-3p预测非小细胞肺癌脑转移发生机制的研究硕士研究生：蔡茜导师：董晓荣教授伍钢教授华中科技大学同济医学院附属协和医院肿瘤中心，武汉，430022摘要【目的】：筛选非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)患者外周血中可预测脑转移发生的microRNA，及其在脑转移发生过程中的相关机制研究。【方法】：通过Real-timequantitativePolymeraseChainReaction(qRT-PCR)检测NSCLC患者外周血中microRNA-325、326、328

2、、330-3p、370及500-3p的表达水平；转染合成的特定microRNA模拟物(mi-330-3pmimics)、模拟物的阴性对照物（miRNAmimicsnegativecontrol）、合成的针对microRNA的抑制剂(mi-330-3pinhibitor)和抑制剂的阴性对照物（miRNAinhibitornegativecontrol）进入肺腺癌A549细胞系；采用MTT方法检测特定microRNA对A549的增殖能力的影响；通过transwell侵袭实验、划痕实验分别检测对A549细胞侵袭及迁移能力的影响；小管形成实验用以检测对A54

3、9血管新生能力的影响；westernblot和qRT-PCR检测相关蛋白和基因的表达水平。【结果】：micro-325、328、330-3p和500-3p在合并/不合并脑转移患者外周血中表达有差异，P＜0.01；但进一步单因素COX回归结果提示，micro-330-3p是NSCLC患者发生BM的危险因素；MTT显示，转染mi-330-3pmimics组的A549细胞存活率较其各组高；transwell侵袭实验、划痕实验及小管形成实验分别显示，转染mi-330-3pmimics组的A549细胞与其余各组相比，侵袭、迁移能力及成管能力皆有增强；相反，转染

4、mi-330-3pinhibitor组的A549细胞与其余各组相比，上述能力皆减弱；qRT-PCR以及westernblot结果示，稳定过表达miR-330-3p的A549细胞中VEGF、EGFR和MMP-9表达升高，沉默miR-330-3p的A549细胞中上述基因表达下调。3万方数据华中科技大学硕士学位论文【结论】：1.血清中miR-330-3p可能作为筛选非小细胞肺癌脑转移的生物标志；2.miR-330-3p可能促进肺癌细胞生长、增强侵袭迁移能力、促进血管形成，进而促进非小细胞肺癌脑转移；3.miR-330-3p发挥作用的分子机制与VEGF、EG

5、FR和MMP-9的表达水平相关。【关键词】：非小细胞肺癌；脑转移；microRNA；A549细胞4万方数据华中科技大学硕士学位论文MicroRNA-330-3pmediatesnon-smallcelllungcancer(NSCLC)brainmetastasisviapromotingNSCLCmigrationCandidate:QianCaiMajor:OncologySupervisor:Prof.XiaorongDongProf.GangWuCancercenter,WuhanUnionHosiptal,Tongjimedicalcoll

6、ege,HuazhongUniverstiyofScience&Techology,Wuhan,430022Abstract【Purpose】:TofindthemarkerspredictingBMintheperipheralbloodinNSCLCpatients.AndinvestigatethefunctionofthosemarkersinBMinNSCLC.【Method】:Inthisstudy，qRT-PCRwasperformedtomeasuretheexpressionlevelofmicroRNA-325，326，328，3

7、30-3p，370and500inperipheralbloodinNSCLCpatients.miR-330-3pmimics，mimicsnegativecontrol，inhibitornegativecontrolwereTMtransfectedintoA549cellsbyusinglipofectamine2000respectively.ThecellviabilitywasdetectedbyMTTassay.Woundhealingassayandcellinvasionassaywereusedtoinvestigatethei

8、nvasionandmigrationabilitiesrespectively.Capillaryform