il17在骨髓干细胞促进肝损伤修复中的作用研究

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1、第四军医大学硕士学位论文血管介入回输至患者肝动脉。针对失代偿期肝硬化患者的临床随机对照研究表明，与仅接受G-SCF处理的患者相比，接受自体干细胞移植的患者肝功能显著提高。至2012年12月，我们对416例失代偿期肝硬化患者进行了自体干细胞移植治疗，随访结果表明，干细胞治疗显著提高了患者的3年生存率（87%，对照组为29%）。我们对42例接受干细胞移植治疗的患者进行了免疫相关指标的检测，结果发现：在干细胞治疗后第1、3、6、9、12月，患者外周血IL-17水平呈持续下降趋势，并与患者肝功能指标的变化呈正相关。提示IL-17可能与BMSCs

2、促进肝功能恢复有关。本研究将采用四氯化碳（Carbontetrachloride,CCl4）制备小鼠肝损伤模型，并对肝损伤小鼠进行同源BMSCs移植治疗。利用这一模型，探讨IL-17在CCl4诱导小鼠肝损伤和BMSCs改善肝损伤过程中的作用，为阐明BMSCs促进肝病患者肝功能恢复的机理提供理论依据。【目的】1.明确IL-17在CCl4诱导小鼠肝损伤中的作用；2.阐明IL-17在BMSCs促进小鼠肝损伤修复中的作用。【方法】1.采用CCl4腹腔注射诱导小鼠肝损伤。在肝损伤诱导过程中，H&E和天狼星红染色检测小鼠肝脏炎症和纤维化程度，血浆生

3、化检测丙氨酸转移酶（alanineaminotransferase,ALT）、白蛋白（albumin,ALB），同时采用ELISA检测小鼠外周血IL-17水平，Real-timePCR检测小鼠肝组织表达促炎因子IL-6、IL-8、TNF-α、IFN-γ、IL-17A、IL-17F以及IL-17RA和IL-17RC的水平，流式细胞术检测肝内单核细胞中Th17细胞的百分比；2.给予特异性抗小鼠IL-17抗体（Anti-IL-17mAb）或重组小鼠（Rm）IL-17干预CCl4诱导小鼠肝损伤过程，H&E和天狼星红染色检测小鼠肝脏炎症和纤维化程

4、度，血浆生化检测ALT、ALB，Real-timePCR检测肝纤维化相关因子基质金属蛋白酶3（Matrixmetalloproteinase3,MMP3）、金属蛋白酶组织抑制剂1（Tissueinhibitorofmetalloproteinase1,TIMP1）和TGF-β1的表达，免疫组化、Real-timePCR-4-第四军医大学硕士学位论文和Westernblot检测肝组织表达α-SMA的情况；63.将同品系小鼠BMSCs经尾静脉移植给CCl4诱导的肝损伤小鼠（5×10BMSCs/只），采用ELISA检测小鼠外周血IL-17水平

5、，Real-timePCR检测小鼠肝组织IL-17A、IL-17F、IL-17RA、IL-17RC及IL-23p19的表达水平，流式细胞术检测肝内单核细胞中Th17细胞的百分比；4.给予Anti-IL-17mAb和RmIL-17因子干预BMSCs治疗CCl4诱导小鼠肝损伤的过程，H&E和天狼星红染色检测肝组织炎症和纤维化程度，Real-timePCR检测肝内胶原层蛋白collagen-1的表达，血清生化检测小鼠肝功能（ALT和ALB水平）。【结果】1.IL-17与小鼠肝损伤过程密切相关H&E、天狼星红染色和血清生化检测结果显示，连续6周

6、CCl4腹腔注射成功诱导出小鼠肝损伤模型，表现为肝组织内大量炎性细胞浸润、纤维化形成，外周血ALT升高而ALB水平显著降低。ELISA、Real-timePCR和流式细胞术检测发现，在CCl4诱导肝损伤过程中，外周血IL-17水平和肝组织内IL-17A、IL-17F、IL-17RA、IL-17RC、IL-6、IL-8、TNF-α的表达水平逐渐升高，而肝组织内Th17细胞百分比和IFN-γ的表达水平无明显变化。当撤除CCl4后，小鼠肝损伤逐渐恢复，外周血IL-17水平和肝组织内IL-17A、IL-17F、IL-17RA、IL-17RC、I

7、L-6、IL-8、TNF-α的表达水平也逐渐恢复至几乎正常。2.IL-17促进CCl4诱导小鼠肝损伤在用CCl4制备小鼠肝损伤过程中，和仅给予CCl4腹腔注射组相比，联合注射RmIL-17能显著加重小鼠肝损伤，而联合注射Anti-IL-17mAb却显著减轻CCl4诱导的肝损伤。Real-timePCR、免疫组化和Westernblot结果显示，与单纯使用CCl4相比，联合使用CCl4和RmIL-17显著增加了肝组织内MMP3、TIMP1、TGF-β1、α-SMA的表达，而联合使用CCl4和Anti-IL-17mAb却抑制了MMP3、TI

8、MP1、TGF-β1、α-SMA的表达。3.同源BMSCs下调小鼠IL-17表达水平同源BMSCs移植治疗能有效改善CCl4诱导的小鼠肝损伤。在BMSCs促进肝损伤恢复的同时，小鼠外周血IL-17水平也明显