il17在con a诱导的自身免疫性肝损伤中的作用及其机制分析

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1、IL一17在ConA诱导的自身免疫性肝损伤中的作用及其机制研究中文摘要出现炎性细胞浸润。另外，我们检测了模型小鼠血清中TNF一a和IL一6的水平，作为导致组织损伤最重要的细胞因子TNF一a和IL一6在ConA处理组显著升高。因此通过以上结果证明我们成功诱导了肝损伤，建立了ConA诱导的自身免疫性肝损伤模型。为了了解IL一17在本模型中是否起作用，我们利用TaqMan探针的实时荧光定量PCR和ELIsA技术检测了IL一17在模型小鼠肝组织中的表达变化情况，同时比较了IL一17的表达水平与肝脏损伤程度的相关性。实验结果表明，IL一17在ConA诱导的免疫性肝

2、损伤组织中显著上调表达，IL一17表达水平与肝脏损伤程度正相关，提示IL一17表达与免疫性肝损伤具有一定的相关性，IL一17的上调表达可能参与了免疫性肝损伤的病理发生。第二部分IL一17在conA诱导的自身免疫性肝损伤中的作用通过第一部分的实验证明在ConA诱导的自身免疫性肝损伤小鼠肝脏局部，IL一17增多。在本部分中，我们着重研究IL一17在本模型中所起的作用。首先，我们进行了特异性IL一17单克隆抗体的体内阻断实验，观察肝脏病理变化，检测ALT水平、TNF一a和IL一6表达变化，评估抗IL一17单克隆抗体对ConA诱导的自身免疫性肝损伤的影响，初步探

3、讨它的可能机理。实验结果表明，特异性IL一17单克隆抗体干预明显降低了血清ALT水平(p<0.05)、改善了肝脏病理损伤、降低了肝脏组织中促炎症物质如TNF一a和IL一6的表达水平。这些实验资料说明，抗IL一17单克隆抗体对ConA诱导的自身免疫性肝损伤具有明显的保护作用，IL一17促进相关的炎症细胞因子TNF一a和IL一6的释放可能是导致肝脏损伤的重要机制之一。其次，为了进一步了解内源性IL一17在ConA诱导的急性肝损伤中的作用，我们用表达可溶性的IL一17R:Fc融合蛋白重组腺病毒载体(AdlL一17R:Fc)处理小鼠。这种融合蛋白可以与IL一17

4、R结合，从而阻断IL一17的传导通路。结果显示，经可溶性的IL一17R:Fc融合蛋白重组腺病毒载体处理后，血清中转氨酶水平明显降低同时肝细胞坏死减轻。同时，与肝损伤水平相平行，可溶性的IL一17R:Fc融合蛋白重组腺病毒载体阻断IL一17与其受体结合后，TNF一a和IL一6明显下降。以上结果提示，阻断IL一17信号通路可以明显地减轻ConA诱导的急性肝损伤，并且此过程与阻断了在本模型中重要的细胞因子TNF一。和IL一6相关。最后，我们构建了含有细胞因子IL一17的真核表达质粒。我们以钙转法将质粒导入Huh7细胞，获得含IL一17转染细胞。将以上转染细胞的

5、表达上清浓缩后进行ELISA分析可见明显IL一17表达，证实以上所构建的重组质粒能够在体外进行有效表达。体内实验显示:该质粒注射小鼠后，小鼠体内的IL一17明显升高。以上结果提示:所有构建的重组质粒可在体内外得到有效表达。尾静脉高压注射复旦大学_[海医学院硕士论文IL一17在ConA诱导的自身免疫性肝损伤中的作用及其机制研究中文摘要质粒PcDNA3.1一IL一17上调小鼠体内的IL一17，明显的加重了模型小鼠的肝损伤程度。实验结果证明，血清ALT较对照组明显增高，并且伴有肝脏细胞坏死面积扩大。更重要的是，相关炎症细胞因子TNF一。和IL一6也较对照组明显

6、升高。这些数据提示，IL一17与ConA诱导的自身免疫性肝炎有着密切的关系。第三部分ConA诱导的自身免疫性肝损伤中IL一17的来源我们己经证明IL一17在ConA诱导的自身免疫性肝炎中起着重要的作用。鉴于以上原因，研究本模型中IL一17的细胞来源对于自身免疫性肝炎的发病机制的研究具有重要的意义。我们检测了ConA诱导的自身免疫性肝炎模型中肝脏局部的单个核细胞分泌IL一17的情况，实验结果显示，肝脏局部分泌IL一17的细胞比例较对照组明显升高，所以我们认为在肝脏损伤中起着作用的IL一17是肝脏局部细胞分泌的。鉴于此，我们首先检测了ConA诱导的自身免疫性

7、肝损伤中分泌IL一17的T细胞，我们发现在模型小鼠的肝脏中分泌的IL一17的T细胞比例，与前述测得的其在总细胞中的比例一致，这提示，肝脏局部分泌IL一17的细胞主要是T细胞。因此，我们在T细胞的基础上，由荧光标记的抗CD4与抗CDS抗体染色检测了不同的T细胞亚群分泌IL一17的情况。实验结果提示，IL一17主要是由CD4十CDS-和CD4一CDS一这两群T细胞分泌的，表示这肝脏局部产生IL一17的细胞来源存在着通常意义上的Thl7细胞，即分泌IL一17的CD4十T细胞。但是，这里还存在着一群异于常规的分泌IL一17的细胞群，既cD4一cDS一T细胞亚群。

8、同时我们发现，NKT细胞的数量和比例在肝脏中ConA处理组较对照组明显升高。进一