瘢痕疙瘩riz基因和tnfr-ⅱ基因突变的研究

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3、l基因突变的研究摘要【目的】瘢痕疙瘩是整形外科基础研究的重要课题，其根本形成机制迄今尚未查明，寻找瘢痕疙瘩的相关调控基因已成为当前瘢痕研究的热点之一。本课题组已经应用比较基因组杂交技术(CGH)成功构建病理性瘢痕染色体变异频率图谱，证实在l号染色体短臂末端存在DNA拷贝数的高频率缺失，

4、并通过微卫星不稳定性分析(MSI)发现在1p36区域存在基因杂合性缺失(LOH)，提示该区域可能存在相关瘢痕抑制基因。DNA测序(DNAsequencing)技术是一种最为精确的分子诊断技术，在遗传性疾病和肿瘤的诊断领域内占有重要地位，目前主要应用于鉴定基因，检测突变，分析噬菌体文库等方面。本课题采用DNA测序技术，对DNA拷贝数高频率缺失的1p36区域的目前研究热点基因片段进行DNA序列测定，检测瘢痕疙瘩相关基因DNA序列变化情况，寻找可能存在的瘢痕疙瘩抑制基因并精确定位其在染色体上的位置，进而从基因水平阐明瘢痕疙瘩的发病机制，为从基因水平防治瘢痕疙

5、瘩打下坚实基础。【方法】收集患者瘢痕疙瘩组织和血液标本，分别抽提出相应基因组DNA，在已经病理性瘢痕染色体变异频率图谱和MSI证实的DNA拷贝数高频率缺失的1号染色体lp36区域，采用目前国外研究报道较多的RIZ基因第8外显子A。8，和A。9，位点以及TNFR—II基因第10外显子1573片段进行PCR扩增，回收纯化后进行基因组DNA测序，将瘢痕组织的DNA序列分别与血液和Genebank的对应序列进行比较，分析所检测基因片段的DNA序列变化情况。【结果】将瘢痕组织和ff【L液的相关基因序列与Genebank的正常序列进行比较，所选取的三条基因片段，在

6、血液标本中均未发现突变，而瘢痕疙瘩组织的相关序列经分析提示均有不同程度的突变，而且是多位点、多类型的。具体变化情况如下：(1)RIZ基因第8外显子Ac8J位点：经基因序列分析发现19例患者的瘢痕组织DNA样本中，有18例发现突变，突变率为94．74％。共检测出6种不同的基因突变，其中d种为点突变，2种为移码突变，其中12例患者的5053编码子发生移码突变，占病例数的63．16％。瘢痕疙瘩组织中RIZ基因第八外显子A(8)位点的突变呈多态性，为多位点、多类型基因突变。(2)RIZ基因第8外显子A。。，位点：经基因序列分析发现19例患者的瘢痕组织DNA样本

7、中，有9例发现突变，突变率为47．37％。共检测出9种不同的基因突变，其中7种为点突变，2种为移码突变。瘢痕疙瘩组织中RIZ基因第八外显子A(9)位点的突变呈多念性，为多位点、多类型的基因突变。(3)TNFR儿基因第10外显子l573片段：经基因序列分析发现19例患者的瘢痕组织DNA样本中，有10例发现突变，突变率为52．63％。共检测出5种不同的基因突变，其巾4种为点突变，1种为移码突变。其中6例患者的1663编码子发生移码突变，占病例数的31．58％。瘢痕疙瘩组织中TNFR—II基因第lO外罹子1573片段的突变呈多态性，为多位点、多类型的。【结论

8、】瘢痕疙瘩组织的3种基因片段中均发现突变。RIZ基因的突变可能导致该基冈的调控功能发生改变，RIZl的表达降低或不表达，从而使瘢痕疙瘩中的成纤维细胞过度增生。TNFR—II基因的突变可能导致成纤维细胞表面的TNFR数目减少，TNF—a对相应的细胞毒作用减弱，成纤维细胞过度增殖，导致瘢痕疙瘩形成。瘢痕疙瘩的发生发展受多基因调控，而不是单一基因的调控。【关键词】瘢痕疙瘩RIZ基因TNFR—LI基因基因突变StudyonGeneMutationofRIZGeneandTNFR-IIgeneinKeloidAbstract[Objective]Keloidis

9、animportantsubjectintheelementaryresearchofplas