瘢痕疙瘩中小分子蛋白多糖decorin基因表达研究

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1、写获论坛ArxAM(9p，1、AO+f6多糖ecorin人月衣电研x.*岛大学医学院附属医院《266011)张维娜吴延芳毛凯平摘要目的检测1t痕疙瘩中目前蛋白多糖的研究已向神经、1.1.2研究对象小分子蛋白多糖decorin的基因表组织发生、肿瘤及创伤修复等多①正常对照组:标本取自达水平改变，探讨其在瘫痕疙瘩学科渗透，成为当今生物医学前手术切除的正常人皮肤，取材部位形成机制中的可能作用。方法以沿学科中的研究热点之一。前臂2例，前胸1例，肩部1例，腹含decorincDNA的重组质粒为模Decorin是近年才分

2、离出来的部1例。其中男2例，女3例，年龄板，体外转录合成decorincRNA一种主要的小分子蛋白多糖1746岁。探针，采用原位杂交技术，检测(SLAP)，存在于儿乎所有细胞外②增生期keloid组:选择临床瘫痕疙瘩增生期、静止期和正常基质中，能直接调整基质成分和红肿、痛痒症状明显，皮损呈进行皮肤组织中decorinmRNA表达水细胞粘附及增殖。本文用灵敏度J性发展，要求手术切除治疗的病平。结果增生期瘫痕疙瘩中较高的原位杂交方法，检测keloid人前胸2例，颈部1例，肩部1例decorinmRNA表达水平较静

3、止期和正常皮肤组织中decorin的基因背部1例，年龄18-34岁，其中男3瘫痕疙瘩和正常皮肤减少〔P<表达改变，探讨其在keloid形成中例，女2例病史6个月一4年。0.01,P<0.01)e静止期瘫痕疙瘩的可能作用，为keloid的病理机制③静止期keloid组:选择临床与正常皮肤相比，decorinmRNA研究提供新的思路。红肿、痛痒症状轻微，皮损停止发水平无显著差异(P>0.05)。结论展1年以上，要求手术切除治疗的瘫痕疙瘩组织中decorin的基因表1.材料与方法病人。肩部1例，前胸2例，耳垂1达发

4、生变化，尤其在癖痕疙瘩的1.1材料例，背部1例，年龄2443岁，其中增生期改变显著，提示其参与瘫1.1.1重组质粒叭男2例，女3例，病史3一巧年。痕疙瘩的形成过程。本研究所用的质粒均由美国1.2主要方法关键词瘫痕疙瘩decorin国立卫生院，骨科研究所Larry.W1.2.1将获得的质粒P2以氯化基因表达Fisher教授(BoneResearch钙法转入感受态大肠杆菌，扩增后瘫痕疙瘩(keloid)是发生在Branch,NIDR,NIH)提供。提取质粒，经内切酶鉴定分析无误外伤基础上或原发的一种高度增质粒P2

5、(53ng'P1):载体为P后，纯化质粒。生的病理性瘫痕组织，表现为超Blueskriptsk(。一)(Amp`)，插1.2.2选用内切酶BanaHI线性过原损伤范围的明显瘤样增生，入片断约为1.6k6，编码人骨组织化酶切质粒，制备cRNA探针模组织学特点为细胞外基质中大量中decorin蛋白质序列，但5'端缺板;选用内切酶Kpnl，制备RNA胶原、蛋白多糖沉积、胶原排列少编码信号肤的前4个密码子序探针模板，因KpnI酶切后模板带紊乱成结节状或旋涡状。目前研列，宿主菌为JM101或BB4，根有3凸出末端，需用

6、T4DNA酶补究认为细胞外基质(ECM)成份据cDNA片段的插入位点实验设平末端。的合成与降解失衡是病理性瘫痕计如下:1.2.3以线性化质粒为模板，按形成的生物学基础之一[]]。蛋白cDNA片段的制备:EcoR工照德国B.M标记手册体外转录合多糖是细胞外基质中一主要成份，或BanlHI+kpnI成地高辛标记的cRNA和RNA探在过去只被认为是缺乏生物活性，cRNA探针的制备:kpnI酶针，及标记探针的碱裂解气造成病理性瘫痕坚硬的普通生物切线性化质粒，选用T3RNA聚合12.4原位杂交大分子。近年随着细胞生物学

7、和酶。将切除后立即行液氮冻存的分子生物学研究技术的发展，人RNA探针的制备:BamI-Il酶标本制成lopm冰冻切片，多聚甲们认识到蛋自多糖并不是简单的切线性化质粒，选))JIT7RNA聚合醛固定处理后一70℃保存。杂交前填充物，具有多样的生物活性。酶。将切片分别用。.2%Triton-X-100谬-万方数据熟f.山朋民目翻.二犷悦，斑‘PBS处理，蛋白酶K3790;孵育30一质中一种土要的小分子蛋白多糖构可与工型胶原结合，结合位点在分钟和分钟，冰冷的。2'%甘氨酸-PBS(SLAP),1978年由美国国立卫

8、生d带和e带，其糖氨聚糖侧链垂直以叹室0.25%乙酸醉/川MTEA处理，研究院、骨科研究所Fisher教授首于胶原原纤维将相邻的原纤维连温干覆温干燥后加入配置好的杂交液，次分离纯化，其结构由核心蛋白和接起来!田因此decorin通过糖氨16以盖玻片，置湿盒内,2(:杂交一条共价相连的糖氨聚糖侧链组聚糖侧链间形成的抗平行的双螺1a小时，杂交液内探针浓度0.5ng'u成，核心蛋白分子量为45KD，由旋结