teton系统诱导表达人突变a30pαsynuclein小鼠的相关的研究

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1、Tet．0n系统诱导表达人突变A30P口一夥nuclein小鼠的相关研究中文摘要第一部分Tet．orr系统诱导表达人突变A30PQ—synuclein转基因小鼠的构建目的构建Tet．0n系统诱导表达人突变A30P洳sylluclein转基因小鼠。方法通过l汀．PCR方法从人胎脑中克隆野生型sNCA基因，T．A克隆并测序，并利用单核苷酸差异引物定点诱变构建致病突变Ala30pr0的sNCA基因，采用双酶切法构建含Ala3DPr0致病突变基因的pTI辽2．syn载体，酶切鉴定，并测序。利用Tct-on系统

2、，采用显微注射法，同时将pn也2．s)，11目的基因和pBC-rtTA调控基因注入FVB小鼠受精卵的雄原核中，注射受精卵移植到同期发情的假孕受体出生个体，取21日龄的断乳小鼠剪尾法提取DNA，经PCR检测获得阳性转基因小鼠，基因测序验证A30P的突变位点。‘结果电泳结果显示ImPCR方法成功克隆了SNCA基因的cⅨ叮A序列，目的基因为481bp；含致病突变A1a30Pr0的SNCA基因的p1砸2．s)，Il载体经丑臼朋HI和肺耐Ⅲ双酶切鉴定正确，测序结果也显示编码小突触核蛋白第30位氨基酸的密码子由G

3、cA突变为CCA，其相应编码的氨基酸由ma突变为Pr0：经PCR检测检测共得到nTA和A30P突变型a．synucleiIl双阳性转基因F0代小鼠1只，A30P突变型口．syIlucleill单阳性转基因F0代小鼠13只。结论成功构建了受强力霉素调控的高表达A30P突变型洳synucleinT晦0111转基因小鼠。关键词tet．0n；A30P；a．肿uclein；转基因第二部分人突变A30P仅．synuclein转基因小鼠行为学特性的研究目的通过强力霉素(DOX)诱导，使人突变A30Pa．s)，11u

4、clein基因大量表达，观察突变基因表达后小鼠运动功能的行为学变化。方法双阳性转基因FvB小鼠，每组15只，并设双阴性对照组15只，均于强力霉素1．5m鲈nl饮水诱导。分别在诱导2周、诱导4周和诱导8周时对各组动物的行为学指标进行动态观察。小鼠转棒仪测定小鼠转棒潜伏期；小鼠自发活动箱测定小鼠自发活动量；自制小鼠爬杆测定爬杆时间。结果诱导2周组与双阴性对照之间的自发活动、转棒潜伏期及爬杆时间没有Tet．∞系统诱导表达人突变A30Pa—syImclein小鼠的相关研究中文摘要统计学意义；诱导满4周后小鼠的

5、自发活动、转棒潜伏期比阴性对照要明显减少，爬杆时间明显增加(p<0．01)；诱导满8周的小鼠自发活动最少，转棒潜伏期最短，而相应的爬杆时间最长。结论强力霉素诱导对转基因小鼠的运动功能存在显著影响。诱导4周的时候较为明显，并在4周后随着诱导时间的延长出现症状越来越重。关键词帕金森病；强力霉素；运动功能；a．s)，11uclein第三部分人突变A30Pa．synuclein转基因小鼠PD模型的建立与初步鉴定目的转基因FVB小鼠诱导后出现运动功能的变化，诱导4周后运动功能明显衰退，为探讨这一现象，进一步观察

6、突变a．synucleill表达情况以及相应的解剖病理基础。方法双阳性转基因F、m小鼠，每组15只，并设双阴性对照组15只，均于强力霉素1．5m酌m饮水诱导。分别以Westem-bl傩iIlg和IH．PCR法检测诱导2周、4周和8周时a．synuclem蛋白表达及mI矾A水平。小鼠黑质连续切片，酪氨酸羟化酶(TyrosiIlehydroxyl硒e，TH)免疫组织化学染色并观察TH阳性细胞数的变化。结果强力霉素诱导后，a．sy肌cleiIl在小鼠的小脑、脑干、海马、皮层均有表达，海马、皮层表达更多，诱导

7、满4周后，脑干a．s)mucleiIl表达明显增加，8周后增加更明显。转基因小鼠a．sy硼cle瑚阱A水平在脑、肺、肝、脾、肾、胃、肠、胸腺均有表达，而心脏基本没有表达，各脑区洳synucleinRNA在强力霉素诱导4周后为显著。4周时，黑质TH细胞显著减少，8周后减少更明显。结论转基因FVB小鼠通过强力霉素诱导后，脑干仅．s)唧lem大量表达，黑质TH阳性细胞数显著减少。关键词强力霉素；a．sy硼clein；转基因Ⅱ作者：胡伟东指导教师：刘春风．堡卜on诱导表达人突变A30Pa—synuclein小

8、鼠的相关研究英文摘要ResearchonConditionalExpressionofA30P伍一synucIeinTransgenicMicebyTet—onSystemAbstractPanIEstabilishmentofconditionalexpressionofA30Pa—synucleinin乜a11sgenicmicebyTet—onsystemObjec咖eT0co枷CttlleconditionaleXpressionofA30Pa_