重组可溶性fas偶联pkc抑制剂对直肠癌8348细胞靶向杀伤作用的研究

《重组可溶性fas偶联pkc抑制剂对直肠癌8348细胞靶向杀伤作用的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、第三军医大学硕士研究生论文重组可溶性Fas偶联PKC抑制剂对直肠癌8348细胞靶向杀伤作用的研究【摘要】目的针对复发转移直肠癌细胞膜分子靶点，探讨可溶性Fas偶联PKC抑制剂对直肠癌细胞的靶向杀伤作用。方法采用RT—PCR扩增、克隆Fas胞外区，构建真核表达载体pGEX一4T一卜sFas，采用GST融和蛋白纯化法纯化sFas。采用化学偶联法连接sFas与PKC抑制剂CalphostinC。通过细胞抑制率测定(MTT法)检测偶联物对FasL阳性结直肠癌细胞的杀伤作用。结果扩增、克隆Fas胞外区57lbp经限制性酶切和DNA序列测定证实无误。转化

2、宿主菌BL2l表达纯化，经westernBlotting确认sFas蛋白产物。将sFas与PKC抑制剂CalphostinC经化学偶联得到偶联物sFas—CalphostinC。利用PKC酶检测系统检测偶联物具有抑制PKC酶活性作用。偶联物对FasL表达阳性直肠癌细胞HR一8348癌细胞生长抑制率(39．04％)较FasL表达阴性HR一8348癌细胞(33．69％)明显提高(t=4．093，p<0．05)，对外周血单个核细胞杀伤作用不明显(23．08％)，偶联物联合5一氟尿嘧啶对FasL阳性HR一8348细胞的细胞抑制率(68．38±5．07

3、％)明显高于5一氟尿嘧啶对FasL阳性HR一8348细胞的细胞抑制率(36．02±1．50％)(t=l4．05，P<0．001)。结论重组可溶性Fas偶联PKC抑制剂对侵袭行为较强的直肠癌细胞具有较强的靶向杀伤作用。【关键词】直肠肿瘤；可溶性Fas；PKC抑制剂；靶向治疗第三军医大学硕士研究生论文StudyofthetargetkiIingeffectoncolorectaIcarcinoma8348ceIlsbyrecombinantsoIubleFascoupledwiththePKClnhibitor【Abstract】0bjectiv

4、eTostudythetargetkillingeffectofsolubleFascoupledwiththePKCinhibitoronrectalcarcinomacells．aimeddirectlyatthem01ecultargetonthecel1membraneofrectalcancercellsthataresubjecttorecurrenceandmetastase．MethodsTheexpressingVectorpGEX一4T一1一sFaswasconstructedbyRT—PCRamplificatingan

5、dwasclonedtheextracellularregionofFasprotein．ThesFasproteinwaspurifiedbyGSTfusionproteinpurificationsystem．ThesFasproteinwascoupledwithCalphostinC，onekindofPKCinhibitorbySPDP．ThekillingeffectoftherecombinantmatterwasdetectedoncoloreetalcarcinomacellsinwhichFas1igandexpressi

6、onwaspositiVe．ResultsAfteramplificatingandcloningtheextracellularregionofFasprotein，a571bpfragmentwasproVedcorrectbylimitedenzymecuttingandDNAsequencing．AftertransformedintoE．coliBL21，theexpressedandpurifiedproteinwasidentifidbyWesternBlot．ThecouplingmattersFas—CalphostinCw

7、asobtainedbycouplingsFaswithCalphostinC．WiththePKCKinaseActiVityAssayKititwasdetectedthatthecouplingmattersFas—CalphostinCcansuppresstheactivityofPKCkinase．ThegrowthsuppressionratesofcolorectalcarcinomaHR一8348cellswhichexpressedFasLpositiVelyweresignificantlyrisenbysFas—Cal

8、phostinC，thekil1ingeffectofsFas—CalphostinConnormalhumanmonocytewasnotfoundobvious