奥美沙坦酯对高糖培养的人肾系膜细胞保护作用研究论文

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1、奥美沙坦酯对高糖培养的人肾系膜细胞保护作用的研究硕士研究生：刘红阳指导教师：姜一农教授指导小组：路岩教授专业名称：内科学摘要前言：糖尿病肾病(diabeticnephropathy，DN)是糖尿病最常见、最严重的慢性微血管并发症之一，是糖尿病患者的主要死亡原因。DN最早的病理学改变是肾小球肥大、肾小球基底膜增厚以及细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)积聚，这些均可以引起肾小球超滤过及微量蛋白尿。ECM主要产生在肾小球系膜细胞，后者在DN的肾小球硬化中起关键作用。既往研究表明，高糖是DN的始动因素，可引起氧

2、化应激(oxidativestress，OS)。超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)、过氧化氢酶(catalase，CAT)是体内重要的抗氧化酶，可间接反映氧自由基的清除能力。丙二醛(malondialdehyde，MDA)是脂质过氧化产物，可直接反映脂质过氧化的速度和强度。这3个指标的检测有助于综合评价氧化应激水平。高糖、氧化应激可刺激细胞增殖相关因子，如转化生长因子．13l(transforminggrowthfactors，TGF．131)、血管内皮生长因子(vascularendothelia

3、lgrowthfactor，VEGF)产生，参与DN的发生发展。已经证实TGF．Dl是最主要的致纤维化生长因子，在肾小球硬化和间质纤维化发挥重要作用；VEGF在调节肾小球通透性方面起重要作用，病理状态下，它可促进系膜细胞增殖、ECM积聚，介导DN蛋白尿的产生。奥美沙坦酯(olmesartanmedoxomil，OLM)是一种新型非竞争性、高选择性的非肽类血管紧张素IIl型受体(AngiotensinIItype1receptor，ATl)拮抗剂，新近研究表明本品有肾脏保护作用，其在DN发生发展中的肾脏保护作用及机制越来越受到人们

4、的关注。目的：观察奥美沙坦酯对高糖状态下人肾系膜细胞增殖及相关生长因子TGF．Bl、VEGF表达的影响及对细胞氧化应激指标的影响，进一步探讨奥美沙坦酯的肾脏保护作用及机制。方法：正常成年人肾小球系膜细胞(humanrenalmesangialcells，HRMCs)购于美国Sciencell公司。体外高糖培养HRMCs，取5．8代用于实验。实验分4组：1．f氐糖组(glucose5．6mmol／1)。2．高糖组(glucose30mmol／1)。3．f氐糖+DMSO(glucose5．6mmol／l+DMSO2x10～mmol／

5、l，LG+H—DMSO)组。4。高糖+奥美沙坦酯干预组，以低(HG+L．OLM)、中(HG+M．OLM)、高(HG+H．OLM)3组(OLM终浓度分别为2x10～mmol／l、2x10。6retool／1、2x10。5mmoVl)奥美沙坦酯浓度干预48h；以奥美沙坦酯(终浓度2x10。6retool／1)分别干预24h，48h。用比色法检测细胞上清中SOD、CAT的活性及MDA水平；以MTT方法观察细胞增殖；以ELISA方法检测细胞上清中TGF．13l、VEGF的含量；以RT-PCR方法检测细胞TGF．J3l、VEGFmRNA表

6、达水平。结果：1．肾小球系膜细胞在高糖环境的刺激下，细胞明显增殖：细胞上清中SOD、CAT活性显著下降，MDA含量明显升高。同时，肾小球系膜细胞TGF．6l、VEGFmRNA和蛋白表达明显上调。上述趋势在24h可见‘，48h显著增强。2．LG+H．DMSO组分别在各时间点与低糖组对比，可见DMSO(2x10巧retool／1)对正常HRMCs生存无影响。3．高糖环境中的肾小球系膜细胞经奥美沙坦酯干预后，细胞增殖明显受抑制，并呈药物浓度依赖性。4．高糖环境中的肾小球系膜细胞经奥美沙坦酯干预后，SOD、CAT活性升高，MDA含量下降

7、，并呈药物浓度依赖性。5．高糖环境中的。肾小球系膜细胞经奥美沙坦酯干预后，TGF．Dl、VEGFmRNA和蛋白表达下降，并呈药物浓度依赖性。结论：高糖可诱导系膜细胞ROS产生增多，抗氧化酶活力下降。奥美沙坦酯可能通过抑制高糖所致的系膜细胞ROS产生增多及增加抗氧化酶活性，从而抑制增殖相关细胞因子VEGF、TGF．13lmRNA和蛋白表达上调；也可能通过直接阻断高糖诱导的细胞因子(TGF．Bl、VEGF)的表达，抑制系膜细胞增殖，发挥其肾脏保护作用。关键词：奥美沙坦酯糖尿病肾病人肾系膜细胞活性氧转化生长因子．pl血管内皮生长因子2

8、TheprotectiveeffectofolmesartanmedoxomilonhumanrenalmesangialcellsunderhighglucoseconcentrationMasterdegreecandidate：LiuHongyangSup