姜黄素对大鼠破骨细胞的形成抑制作用

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1、中文摘要姜黄素对大鼠破骨细胞形成的抑制作用摘要目的：骨是一种不断更新的组织，骨重建贯穿生命过程的始终。生理条件下，骨吸收与骨再生之间保持平衡状态。如果这种平衡被打破就会发生骨硬化症、骨质疏松症以及局灶性骨溶解等疾病。破骨细胞(osteoclast，OC)是肌体中最主要的骨吸收的效应细胞；多种炎性及非炎性的骨与关节的病变都与OC代谢异常有关。姜黄素(curcumin)是从姜黄中提取的有效成分，主要包括了姜黄素、去甲氧基姜黄素、去二甲氧基姜黄素3种活性成分。具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、清除自由基、抗微生物以

2、及对心血管系统、消化系统等多方面药理作用。但姜黄素对破骨细胞的药理作用尚不清楚。本研究旨在探讨姜黄素对破骨细胞及破骨前驱细胞形成的抑制作用，‘为临床上治疗骨代谢性疾病提供新的药物方法：1全骨髓细胞系的培养：将一只4周龄SD雄性大鼠无菌状态下取其股骨及胫骨，去净骨表面的软组织，剪断长骨两骨垢端，暴露骨髓腔。用10ml注射器抽取a．MEM培养液10ml，自骨髓腔冲出细胞，至骨发白。吹打均匀后离心(2000转／分)，5分钟。加15％胎牛血清a．MEM培养液40ml，吹打混匀成细胞悬液，计算细胞数，配制成2x

3、106／ml细胞悬液，加入1,25(OH)2D3(终浓度为10‘8mol／1)和sRANKL(终浓度为20I，tg／m1)。将细胞悬液注入24孔培养板(O．5ml／孔)，在24孔培养板中添加入不同浓度的姜黄素，分别为0，中文摘要2．5，5，10，20，50ug／ml。每个浓度设4孔(n=4)。第一组为对照组。然后放入5％C0237。C孵育箱中培养。第4天更换一次培养液，去掉3／5体积的旧培养液，换以同体积的含1,25(OH)2D3和sRANKL新培养液。培养至第7天时行TRAP染色，经倒置相差显微镜下

4、计算TRAP染色阳性细胞数。2破骨前驱细胞的培养全骨髓细胞提取后，用SephadexG10过滤除去骨髓间质细胞，搜集非附着性骨髓细胞，配制成2x106／ml细胞悬液，加入1,25(OH)2D3(终浓度为10。8mold)和sRANKL(终浓度为201上g／m1)。将细胞悬液注入24孔培养板(O．5ml／孑L)，在24孔培养板中添加入不同浓度的姜黄素，分别为O，2．5，5，10，20，50ug／ml。每个浓度设4孔(n=4)。第一组为对照组。然后放入5％C0237。C孵育箱中培养。第4天更换一次培养液，

5、去掉315体积的旧培养液，换以同体积的含1,25(OH)2D3和sRANKL新培养液。培养至第7天时行TRAP染色，经倒置相差显微镜下计算TRAP染色阳性细胞数。另外，培养至第7天时对破骨细胞及破骨前驱细胞行TRAP染色，倒置荧光显微镜下观察OC的形态，计算TRAP染色阳性细胞数(3核以上及单核)，观察姜黄素对OC及POC的抑制作用。结果：1全骨髓细胞培养TRAP染色阳性细胞的形态学特征：TRAP染色后，可见阳性细胞胞浆呈紫红色，有许多细长的伪足样突起，胞核多，胞浆丰富，胞浆内含许多空泡结构，胞核大、

6、核仁清晰。2破骨前驱细胞培养TRAP染色阳性细胞的形态学特征：中文摘要TRAP染色阳性细胞特征与全骨髓细胞培养的成熟破骨细胞相似，只是细胞体积较小，多呈单核，偶可见2核者，以类圆形和不规则多边形为主，有伪足。3全骨髓细胞培养阳性细胞计数结果在2．5，5，10，20I-tg／ml姜黄素组(实验组)，TRAP染色阳性的破骨细胞数分别为142--k19．71、77+17．40、76d：1．41和64．25+7．54，而50卜tg／ml姜黄素组细胞全部死亡。对照组TRAP染色阳性的破骨细胞数为125+16．0

7、2。浓度为5，10，20}tg／ml姜黄素组阳性破骨细胞数与对照组比较明显减少(尸O．05)。而且随姜黄素浓度(2．5，5，10，20，50}tg／m1)升高，破骨细胞检出数随之减少。4破骨前驱细胞培养阳性细胞计数结果在2．5，5，10，2099／ml姜黄素组(实验组)，TRAP染色阳性的破骨细胞数分别为679+138．67、491士75．49、449．25+80．67和321．5+49．82，而5099／ml姜黄素组细胞全部死

8、亡。对照组TRAP染色阳性的破骨细胞数为704+67．93。浓度为5，10，201ag／ml姜黄素组阳性破骨细胞数与对照组比较明显减少(PO．05)而且随姜黄素浓度(2．5，5，lO，20，501ag／m1)升高，破骨细胞检出数随之减少。结论：1姜黄素对全骨髓细胞系的破骨细胞及破骨前驱细胞的形成，分化具有抑制作用。2其作用机理可能是直接作用于破骨细胞系列细胞，抑制其形成及分化。中文摘