弓形虫烯醇化酶2基因的克隆与表达 毕业论文

《弓形虫烯醇化酶2基因的克隆与表达 毕业论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、本科毕业论文题目弓形虫烯醇化酶2基因的克隆与表达学院生命科学技术学院专业生物技术（动物方向）毕业届别2014届姓名指导教师甘肃农业大学教务处制二〇一四年五月目录摘要1关键词1Abstract.1Keywords2前言21实验材料21.1目的基因、质粒及菌株21.2主要实验试剂32方法32.1目的基因ENO2的扩增32.2琼脂糖凝胶电泳鉴定42.3克隆载体的构建42.4重组质粒的鉴定62.5重组质粒的诱导表达72.6表达产物的SDS－PAGE电泳检测73结果73.1ENO2基因的RT-PCR扩增73

2、.2pMD-ENO2重组质粒的酶切鉴定83.3pET-ENO2重组质粒的鉴定93.4ENO2基因表达产物SDS-PAGE分析…………………………………………………..94讨论10参考文献（Reference）:11致谢12弓形虫烯醇化酶2基因的克隆与表达摘要:弓形虫是一种专性细胞内寄生原虫，呈世界性分布，可感染包括人类在内的所有脊椎动物。弓形虫严重威胁人类的生命健康，危害公共卫生，对畜牧业的发展造成巨大损失。烯醇化酶(ENO1,ENO2)为虫体不同时期的同工酶，具典型的期特异性，ENO2主要出现于

3、速殖子时期。ENO2特异性定位在胞核中。本研究针对弓形虫ENO基因序列设计引物，采用RT-PCR技术从弓形虫GJS株的cDNA中扩增ENO2基因片段，构建重组质粒pMD-ENO2。测序结果表明，获得的基因序列与NCBI已公布的序列相似性为100%。将ENO2基因定向亚克隆至原核表达载体pET-30a（+）中，并转化至大肠杆菌BL21中，经IPTG诱导表达。经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定表明，ENO2基因在大肠杆菌中成功表达，以包涵体的形式为主，分子量大小约为1335bp。本研究为下一步研制基于排泄分泌抗

4、原的抗弓形虫重组疫苗奠定基础。关键词：弓形虫；烯醇酶2；克隆；原核表达Abstract:Toxoplasmagondiiisanobligateintracellularparasite,ithasaworldwidedistribution,andcaninfectallvertebrates,includinghumans.T.gondiihasseriousthreattohumanlifeandpublichealth,anditcauseshugelossestothedevelopme

5、ntofanimalhusbandry.Enolase(ENO1,ENO2)isanisozymewhichisexistsindifferentperiodsofT.gondii,andithastypicalspecificityindifferentperiods.ENO2ismainlyappearedinthetachyzoite.WedesignedprimersaccordingtoENO2genesequencesofT.gondii,andENO2genewasamplified

6、byRT-PCRfromthecDNAofT.gondiiGJSstraintoconstructarecombinantplasmidpMD-ENO2.SequencingresultsshowedthatthegenesequenceandNCBIpublishedsequencesimilaritywas100%.ENO2genewassubclonedandlinkedtoprokaryoticexpressionplasmidpET-30a(+),transformedintoE.col

7、iBL21,andexpressedbyIPTGinduction.PolyacrylamidegelelectrophoresisidentificationshowedthattheENO2geneexpressedsuccessfullyinE.coli,whichgaveprioritytotheformofinclusionbody,andthesizeisabout1335bpmolecularweight.Thisstudylayafoundationforfurtherdevelo

8、pmentofanti-T.gondiirecombinantvaccines,whicharebasedonthesecretedantigen.Keywords:Toxoplasmagondii;ENO2;clone;prokaryoticexpression前言弓形虫(Toxoplasmagondii13)是一种专性细胞寄生性原虫，具有广泛的宿主群并在世界范围内流行，引起人兽共患弓形虫病。弓形虫作为一种机会感染致病因子，可导致艾滋病患者、器官移植及恶性肿瘤患者等免疫功能损伤或