弓形虫ROP2基因的克隆、表达及单克隆抗体制备

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1、学校代码：10564学号：2015307304分类号：S859.79密级：硕士学位论文弓形虫ROP2基因的克隆、表达及单克隆抗体制备陈雅俊第一指导教师：剡海阔副教授第二指导教师：袁子国教授学院名称：兽医学院专业名称：兽医硕士领域：无答辩委员会主席：刘为民教授中国·广州2018年6月华南农业大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由

2、本人承担。作者签名：_________________日期：_____________学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属华南农业大学。学校有权保存并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅或在校园网上发布并供校内师生和与学校有共享协议的单位浏览（除在保密期内的涉密论文外）；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以允许采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。作者签名：_________________日期：

3、______________导师签名：_________________日期：______________学位论文提交同意书本学位论文符合国家和华南农业大学关于研究生学位论文的相关规定，达到学位授予要求，同意提交。导师签名：__________________日期：______________学科带头人签名：____________日期：______________摘要刚地弓形虫（Toxoplasmagondii，T.gondii）是一种胞内寄生性原虫，呈全球性分布，感染人数达十亿。弓形虫病是一种人畜共患寄生虫病，造成弓形虫脑炎、眼周坏死性炎以及孕妇和孕畜的流产、畸胎及死

4、胎等。主要有三种感染途径：经口感染，血液感染以及胎盘感染，其中经口感染的比例最高，如食入含弓形虫包囊的生肉或水。猫是弓形虫唯一被确认的终末宿主，因此，孕妇应尽量避免与猫接触。迄今为止，市面上暂没有抗弓形虫的疫苗出现，针对弓形虫病患者最为常用且有效的治疗弓形虫病的用药方案是乙胺嘧啶与氨苯磺胺配合使用。弓形虫分四个基因型：I型、II型、III型及非典型基因型，均具有感染及侵入机体的能力，其中又普遍以因II型虫株感染而引起的人弓形虫病居多。弓形虫Prugniaud（PRU）株是II型弱毒株，源于法国，偏噬神经细胞，可穿透血脑屏障侵入多种神经细胞，造成脑部的机械损伤及功能障碍。我

5、们的研究以PRU株弓形虫DNA为模板，以ToxoDB上同为II型的ME49虫株的ROP2基因序列为参考序列设计特异性引物，通过PCR扩增得到ROP2目的基因。并经过序列比对，分析验证发现分子克隆所得ROP2目的基因可用于后续的蛋白表达、单克隆抗体（Monoclonalantibodies,mAbs）制备等研究。弓形虫mAbs具备极大的实用价值，其研究和制备对弓形虫的深入研究具有铺垫作用。根据国内外弓形虫mAbs制备案例的相关报导，弓形虫mAbs多用于抗原检测方法如夹心ELISA法等的建立。尽管有报导称mAbs对弓形虫感染有一定的抵抗作用，但尚未有确切的证据。我们成功的表达

6、了弓形虫ROP2目的蛋白，在经过纯化、复性之后接种KM小鼠得到能分泌特异性抗ROP抗体的B细胞，通过与骨髓瘤细胞融合最终制备抗弓形虫ROP2抗原的mAbs。经验证，该抗体可以与ROP2蛋白特异性结合，并且抗体稳定，没有交叉反应。关键词：弓形虫；棒状体蛋白；ROP2；单克隆抗体ICloning,ExpressionofROP2ofToxoplasmagondiiandPreparationofMonoclonalAntibodyChenYajun(CollegeofVeterinaryMedicine,SouthChinaAgriculturalUniversity,Gua

7、ngzhou510642,P.R.China)AbstractToxoplasmagondiiisanobligateintracellularparasiticprotozoa,presentingglobaldistributing,thecumulativeT.gondiiinfectedpersonsallovertheworldreachedmorethanonebillionpeople.toxoplasmosisisazoonoticparasiticdiseasewhichcauseavarietyofdise