ly-ec诱导肝细胞毒性体外试验的研究

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1、中南大学硕士学位论文LY-EC诱导肝细胞毒性的体外试验研究姓名：刘新民申请学位级别：硕士专业：公共卫生指导教师：钟才高;胡怡秀20070501LY-EC诱导肝细胞毒性的体外试验研究摘要目的：在体外试验系统，探讨浏阳霉素乳剂(Liuyaugmycinemulsifiableconcentrate，LY-EC)对L．02肝细胞抗氧化系统及线粒体能量代谢的影响，为进一步研究浏阳霉素肝损害的毒性机制奠定实验基础。方法：用L-02肝细胞为受试细胞，通过MTT试验检测LY-EC对L-02肝细胞存活率的影响，在>

2、60％细胞存活率的浓度下设置6个试验组即100mg／L、25mg／L、6．25mg／L、1．56mg／L、0．39mg／LLY—EC处理组和1个对照组，LY-EC处理细胞时间为12h。用化学比色法测定谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、肝细胞线粒体琥珀酸脱氢(SDH)、细胞膜ATP酶、谷胱甘肽一S转移酶(GST)活性和线粒体膜通透性转运孔(PTP)开放度；用高效液相色谱法检测不同浓度LY-EC对肝细胞中腺苷酸(ATP，ADP，AMP)含量的影响，并分析ATP／ADP比

3、值以及负荷能量(EC)的变化；电镜观察高、中浓度LY．EC对线粒体超微结构的影响。结果：在100mg／L．0．39mg／L处理浓度范围，LY-EC对L一02肝细胞具有明显细胞毒性，其细胞存活指数与LY-EC处理浓度呈负明显相关“-=．0．939)。LY-EC处理的肝细胞与对照组比较，其细胞SOD、SDH、ATP酶与GST活性显著降低(P

4、对照组比较显著降低(P

5、hepatotoxicity／nvitrotest0bjective：ToexploretheeffectsofLY—EConoxidativedamage，energymetabolismofmitochondriaandactivitiesofenzymeinL-02hepatocytes．Methods：TheeffectsofLY—EConcellsurvivalratewereassessedbythereductionsoftetrazoliumdye(MTT)inculturedL-0

6、2hepatocytes．TheconcentrationsofLY—ECatabove60％survivalratewereselectedforthefollowingtcsts．L-02hepatocytesinalltestswereincubatedwith100mg／L，25mgI_tmol／，6．25mg／L，1．56mg／L，O．39mg／LconcentrationsofLY—ECfor12haccordingtoeellsurvivalrate．Thelevelsofmaloni

7、caldehyde(MDA)andtheglutathione(GSH)，theactivitiesofsuperoxidedismutase(SOD)，succinatedehydrogenase(SDH)，ATPase，glutathionetransferase(GST)andthemitochondrialpermeabilitytransitionpore(PTP)weremeasuredbycolorimetrymethod．ThelevelsofcellularATP，ADP，AMPc

8、ontentaswellasthechangesofATP／ADPratioandtheenergycharge(Ec)weredetectedbyhighperformanceliquidchromatography(HPLC)，whiletheultrastructureofmitochondriawasobservedundertheelectronmicroscope．Results：LY-ECinducedsevereoxidativedamageincul