川楝子醇提物体外肝细胞毒性研究

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1、川楝子醇提物体外肝细胞毒性研究【摘要】目的：考察川楝子醇提物体外细胞毒性。方法将川楝子醇提物倍比稀释后与小鼠肝细胞接触培养，通过显微镜观察其形态，采用MTT法量化细胞毒性，计算相对增殖率。结果：川楝子醇提物对肝细胞的生长抑制作用无统计学差异(P〉)，川楝子醇提物肝细胞毒性级别为0级。结论:川楝子醇提物无明显的肝细胞毒性。【关键词】川楝子醇提物;细胞毒性;MTT法川楝子(FructusToosendan)是临床常用中药。据《中国药典》XX年版所载为楝科植物川楝0的干燥成熟果实，有肝小毒。本文用MTT法考察川楝子醇提物对肝细胞的毒性程度。1材料与方法材料与试剂。小鼠，1640培养液，小牛血清，

2、噻哇蓝，C02恒温培养箱，酶标仪，显微镜。2实验方法供试品溶液制备:用含10%血清的1640培养基将供试品稀释至所需浓度。细胞接种：用机械分离法，将小鼠肝脏剪碎，研磨，使肝细胞从肝组织上脱落，获肝细胞，制成单个细胞悬液。用含10%血清的1640培养液种植消化并稀释，将细胞密度调整为IX106个/ml，接种到96孔培养板，每孔接种200ul细胞悬液。置C02培养箱37°C培养使细胞贴壁24h。法:取8m1供试品，倍比稀释成6个不同浓度。设细胞对照组和6个不同浓度供试品组（从高到低浓度依次为I组、II组、III组、IV组、V组、VI组），每组8个复孔。在各孔中分别加入lOOuL培养液及100u

3、L不同浓度的供试品稀释液，置C02培养箱继续培养72h。置显微镜下观察细胞形态（图1）。每孔加入MTT溶液50uL，37°C孵育4h。置显微镜下观察细胞形态（图2）。弃去孔内培养基和MTT溶液，再加入DMS0200UL，混匀lOmin,采用酶标仪，在492nm和630nm处分别测定吸光度A值，用各孔A492nm_对应孔A630nm，取平行4孔差值计算各组平均值。按下式计算细胞相对增殖率：细胞相对增殖率（RGR）=A/A0X100%式中：A为供试品组吸光度；A0为细胞对照组吸光度均值。统计方法。实验数据采用统计处理，计量数据A值以（X土s）表示，采用t检验进行比较。3结果细胞形态学观察。显微

4、镜下观察，肝细胞呈贴壁生长，细胞多呈圆形、三角形、梭形，胞浆丰富，细胞核有单或双核，呈圆形或椭圆形。在每孔加入MTT溶液37°C孵育4h后，细胞生长密集，其形态和核相均没有发生改变。结果见图1、注：与细胞对照组比较朴＜，W＜,林补＜4结论川楝子乙醇提取物无肝细胞毒性。5讨论细胞活性和增殖状况的测定是评价药物毒性过程不可或缺的步骤。MTT法是最为简单、迅速和高敏感性的检测细胞活性与生长增殖的方法。其原理为：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶物__甲臜，并沉积在细胞中，而死细胞则无此功能。DMSO能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其

5、光吸收值，可间接反映活细胞数量，同时也可计算细胞相对增值率（RGR）或抑制率。本实验结果表明，川楝子醇提物有明显的促进肝细胞生长增殖作用。RGR与药物毒性级别的对应关系为：当RGR大于或等于100%时，级别为0级；当RGR在75%99%时，级别为1级；当RGR在50%74%时，级别为2级;当RGR在25%49%时，级别为3级;当RGR在1%24%时，级别为4级；当细胞无增值率时，级别为5级。本实验结果显示，不同浓度供试品RGR值均高于100%。可见，川楝子醇提物对肝细胞无明显的毒性。参考文献[1]周继春，杨海燕，徐晓月，何燕.柴胡注射液体外细胞毒性研究[J].药物分析杂志，XX;30(9)

6、：1809-1812[2]蒋青锋，陈志良，包杰，刘喜荣，武金宝.银杏内酯纳米粒细胞毒性研究[J].中国医药指南，XX;8(24):23-25