川楝子致小鼠肝毒性时效、量效关系研究论文

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1、川楝子致小鼠肝毒性时效、量效关系研究论文.freell，置冰箱，保存备用。临用前，用蒸馏水分别配成所需浓度的药液（以下简称“川楝子”）。1.3试剂丙氨酸氨基转移酶（ALT）试剂（批号060339）；天冬氨酸氨基转移酶（AST）试剂（批号051210，均由上海丰汇医学科技有限公司提供）。1.4仪器AR2130电子天平（奥豪斯国际贸易上海有限公司）；全自动生化分析仪HITACHI7020（日本HITACHI公司）；系统显微镜BX51/BX52（日本奥林巴斯光学株式会社）；全能型脱水机（徕卡公司）。2方法2.1口服半数致死量(LD50)测定取小鼠，雌雄各半，随机分为5组，每组10只。在168～23

2、2g/kg之间按照等比级数(0.9)确定4个给药剂量。各给药组按0.4ml/10g灌胃1次，正常组同时灌服等容量蒸馏水。连续观察7d。观察并记录给药后的一般状况和死亡情况；死亡小鼠解剖后肉眼观察各脏器有无异常变化。2.2口服“毒性时效”关系研究取小鼠，雌雄各半，随机分为8组，按处理时间点依次为0（即正常组），1，2，6，12，24，48，72h组。按0.4ml/10g灌胃1次，0h组小鼠灌服蒸馏水，其余各组灌服188g/kg川楝子。于相应时间点称量小鼠体重，摘眼球取血，血3000r/min离心10min，取血清，以全自动生化分析仪测定血清ALT，AST。摘取小鼠肝脏、脾脏、胸腺，称重并计算脏

3、器指数［4］。另取一部分肝组织，常规HE染色，光学显微镜下观察其组织形态学变化。对肝组织形态进行病理分级、积分［1］：肝组织结构正常，无明显变性、坏死及炎症细胞浸润，0分；肝小叶结构尚正常，可见明显的混浊肿胀、气球样变或脂肪变性，散在点状坏死(＋)，1分；肝小叶结构不清，可见明显的灶状坏死，伴有炎症细胞浸润(＋＋)，2分；肝小叶结构不清、可见明显的片状坏死，伴有炎症细胞浸润(+++)，3分；坏死细胞弥漫性存在于肝小叶中央，层次较多，伴有炎症细胞浸润(++++)，4分。2.3口服“毒性量效”关系研究取小鼠，雌雄各半，随机分为6组，即正常组和川楝子5个剂量组。按0.4ml/10g灌胃1次，正常组

4、灌服蒸馏水，川楝子各剂量组分别灌服166，81，57，40，28g/kg川楝子。1h后，按“2.2”方法测定血清ALT，AST，计算脏器指数，另取一部分肝组织，用于观察组织形态学变化。2.4统计方法使用SPSS13.0统计软件Probit法计算LD50、LD99和LD1。Radit法对肝组织病理积分的数据进行统计分析。计量资料采用±s表示，使用SPSS13.0软件进行统计处理，两组间比较采用t检验法，多组间比较采用单因素方差分析法。P0.05或P0.01为差异有显著性。3结果3.1口服LD503.1.1给药后的一般状况部分动物在给药后0.5～1h出现腹腔震颤，活动减少，身体略发凉，气息微弱。

5、继而，出现异常反应的小鼠部分死亡，死亡时间集中在给药后的4h内。死亡小鼠肝脏肉眼检查可见有不同程度的颜色变深、表面粗糙等，胃肠道内容物充盈，肠壁充血，其余脏器未见有异常改变。存活的动物两便增多。给药12h后部分有异常反应的小鼠可逐渐恢复正常。3.1.2死亡情况正常组小鼠死亡为0；川楝子各组按剂量从低到高的死亡数依次为0，3，5，10。计算LD50为200g生药/kg，95%可信限为192～212g/kg；LD1为166g/kg，95%可信限为134～179g/kg；LD99为244g/kg，95%可信限为226～307g/kg。3.2口服“毒性时效”关系3.2.1对血清ALT，AST的影响给

6、药后1～12h，血清ALT，AST值均有不同程度的升高，与正常组比较有显著性差异（P0.05或P0.01）；ALT，AST值均在给药后1h达到高峰，毒性持续时间约24h。结果见表1。3.2.2对肝、脾、胸腺脏器指数的影响给药6h后即可出现肝脏明显肿大，肝指数升高，其中24h肝脏指数升高最为明显；给药12h后小鼠脾脏指数开始下降；给药24h后小鼠的胸腺指数出现明显下降。结果见表2。3.2.3对肝组织形态的影响光镜下观察，正常组肝小叶结构清晰完好，肝细胞未见明显变性、坏死，肝窦未见明显淤血扩张；给药24h后，可见肝小叶结构尚正常，肝细胞水肿，出现气球样变，水肿变性广泛。积分统计结果表明，川楝子给

7、药24h后对肝组织产生明显损伤，与正常组比较有显著性差异(P0.01)。结果见表3及图1～4。表1川楝子不同时间对小鼠ALT，AST的影响表2川楝子不同时间对小鼠脏器指数的影响表3川楝子不同时间给药后对小鼠肝组织形态的影响3.3口服“毒性量效”关系3.3.1对血清ALT，AST的影响川楝子81，166g/kg剂量组ALT升高，与正常组相比有显著性差异(P0.05或P0.01)，且呈剂量依赖性。结果见表4。3.