pf4通过tlr4%2fnf-κb信号途径上调巨噬细胞mmp-9表达

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1、南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：年月日南华大学学位论文版权使用授权书本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以编入

2、有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。作者签名：导师签名：年月日年月日目录中文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1英文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„4前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„7材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„9分组与结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„12讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„25结论„„„„„„„„„„„„

3、„„„„„„„„„„„„„28参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„29英文缩略语索引„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„32综述„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„34发表论文„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„40致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„41PF4通过TLR4/NF-κB信号途径上调巨噬细胞MMP-9的表达研究生：何钒导师：杨永宗专业：病理与病理生理学中文摘要研究背景：动脉粥样硬化（AS）是一种慢性炎症性病理发展过程，血管壁的炎症在动脉粥样硬化发病机制中具有重要作用。已

4、有研究证据显示，早在动脉粥样硬化病变的初期，血小板作为一种炎性细胞，就参与引起血管内皮活化损伤等反应过程。血小板因子4（PF4）是血小板活化后释放出的含量最多的蛋白之一，越来越多的研究证据表明，PF4参与动脉粥样硬化的进程。但由于至今未能确定PF4的特异性细胞表面受体，PF4在动脉粥样硬化中的具体作用机制还不十分清楚。TLR4是TOLL样受体家族成员之一，它在动脉粥样硬化斑块形成中发挥重要作用。研究发现，在人粥样斑块病变处TLR4存在高表达，并且证实，正是由于TLR4的识别功能，导致一系列与AS有关的细胞因子被合成释放，其中包括基质金属蛋白酶9（

5、MMP-9）等。MMP-9在粥样硬化斑块处的血管重构、斑块的不稳定性及其破裂诱发的血管疾病中都起着很重要的作用，提示TLR4信号通路不仅激活动脉粥样硬化过程中的固有免疫反应，还参与血管重塑过程。本研究以THP-1源性巨噬细胞为观察对象，探讨PF4是否通过TLR4介导的信号途径来调节巨噬细胞MMP-9的表达，为血小板活化在动脉粥样硬化发生发展中的作用提供实验依据。1目的：通过观察PF4对巨噬细胞MMP-9表达影响，研究TLR4/NF-κB信号途径在PF4调节巨噬细胞MMP-9表达中的作用，以期探讨PF4对动脉粥样硬化斑块稳定性的可能影响。方法：培养

6、THP-1单核细胞，采用PMA诱导细胞分化为贴壁的巨噬细胞，无血清培养基同步化12小时后开始实验。1.采用RT-PCR技术检测THP-1源性巨噬细胞MMP-9和TLR4mRNA的表达情况。2.选择0ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml浓度的PF4处理细胞，RT-PCR技术检测MMP-9和TLR4mRNA的表达变化，WesternBlotting技术检测MMP-9和TLR4蛋白的表达变化，ELISA技术检测NF-κB蛋白的表达变化。3.观察TLR4阻断剂对PF4诱导THP-1源性巨噬细胞MMP-9表达的影响

7、，RT-PCR和WesternBlotting技术分别检测细胞MMP-9的mRNA和蛋白表达变化，ELISA技术检测NF-κB蛋白表达变化。4.观察NF-κB阻断剂对PF4诱导THP-1源性巨噬细胞MMP-9表达的影响，RT-PCR技术检测细胞MMP-9mRNA表达变化。结果：THP-1源性巨噬细胞存在MMP-9和TLR4的表达；巨噬细胞MMP-9、TLR4和NF-κB的表达随着PF4处理浓度的升高而升高；TLR4阻断剂对PF4诱导巨噬细胞MMP-9表达有抑制作用；NF-κB阻断剂（PDTC）抑制PF4引起的巨噬细胞MMP-9高表达。2结论：1.

8、PF4促进THP-1源性巨噬细胞MMP-9的表达；2.PF4可能通过TLR4/NF-κB信号途径上调巨噬细胞MMP-9的表达。关键词：动