高糖对巨噬细胞tlr4信号转导的调节作用

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1、授予单位代码10089^_学号或申请号13372HebeiMedicalUniversity硕士学位论文在职科学学位高糖对巨噬细胞TLR4信号转导的调节作用学位申请人：曹爽导师：尹晓琳教授专业：免疫学二级学院：基础医学院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组〉的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文,第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均

2、归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。，/>z年^曰河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写,文责自负。研究生签名：、秦奭导师签章:yOiy年/月4曰目录中文摘要……………………………………………………………………1英文摘要……………………………………………………………………3英文缩写……………………………………………………………………6研究论文高糖对巨噬细胞TLR4信号转导

3、的调节作用前言……………………………………………………………………7材料与方法……………………………………………………………9结果……………………………………………………………………19附图……………………………………………………………………22附表……………………………………………………………………30讨论……………………………………………………………………35结论……………………………………………………………………..37参考文献………………………………………………………………37综述巨噬细胞与糖尿病肾病………………….…………………………40

4、致谢…………………………………………………………………………53个人简历……………………………………………………………………54高糖对巨噬细胞TLR4信号转导的调节作用摘要目的：糖尿病肾病（DiabeticNephropathy,DN）是糖尿病（DiabetesMellitus,DM）造成的严重和危害性较大的一种慢性并发症。其发病机制与慢性炎症有关，动物实验和DN临床患者的研究中均发现肾脏组织大量浸润的炎症细胞以巨噬细胞为主。其浸润程度与肾组织的损害程度趋势一致呈正相关。因此，巨噬细胞介导的炎症反应是加快DN发展的重要原因之一。TLR4是巨噬细胞表

5、面的模式识别受体，TLR4信号通路在DN的发病中的作用逐渐受到人们的关注，许多临床和实验均表明TLR4在高糖状态下表达增高。生理条件下LPS结合巨噬细胞和树突状细胞表面的TLR4可诱导促炎信号和抗炎信号的转导，分别产生促炎因子TNF-α、IL-β和抗炎因子IL-10，来维持炎症因子的平衡。那么，在糖尿病状态下巨噬细胞介导的TLR4的激活是否改变了这种平衡状态，导致DN的发生呢？目前还未见详细报道。因此，本课题依据前期结果和文献资料，在体外用高糖培养巨噬细胞，用TLR4的不同配体进行刺激，观察TLR4介导的促炎和抗炎信号转导分子的表达，探讨高糖对巨噬

6、细胞TLR4信号转导的影响，明确巨噬细胞在DM和DN发生中的炎症机制。方法：1经PMA活化的THP-1细胞同时用正常培养基和高糖培养基培养24小时后，再用LPS刺激，在0、2、4、8、16、24小时收集细胞。用Real-timePCR检测炎症因子IL-10、IL-1β、TNF-αmRNA的表达水平。2经PMA活化的THP-1细胞同时用正常培养基和高糖培养基培养24小时后，再用LPS刺激，在0、2、4、8、16、24小时收集细胞上清；用HSP60刺激24h收集细胞上清用ELISA检测炎症因子IL-10、IL-1β、TNF-α的表达水平。3经PMA活化

7、的THP-1细胞同时用正常培养基和高糖培养基培养24小时后，再用LPS刺激，在0、15、30、60、120、180min收集细胞。另一组用LPS和HSP60刺激，在0、30、60、180min收集细胞，用Westernblot检测p110δ、P-NF-κBp65、NF-κBp65、P-AKT、AKT的表达水平。1结果：1与空白对照组相比，IL-10mRNA正常组与高糖组在2h、4h时表达明显增高,IL-1βmRNA正常组与高糖组在2h、4h、8h时表达明显增高,TNF-αmRNA的正常组与高糖组在2h、4h、16h、24h时表达明显增高。对照组IL

8、-10mRNA表达量的高峰值出现在LPS刺激后的2小时，高糖组出现在4小时，出现延迟现象。高糖组在4小时IL-1βmRNA