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1、海带硫酸多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节作用:宋剑秋 徐誉泰 张华坤 张可炜 徐中平 王海仁关键词：海带硫酸多糖巨噬细胞免疫调节 近年来人们发现某些藻类多糖具有明显的抗肿瘤作用［1］。我们从海带中提取了一种天然生物大分子海带多糖(Laminarinsulfate,LAS),由L-岩藻糖、D-半乳糖等糖基组成的硫酸酯化多聚物,平均分子量为1.5×105。该多糖对小鼠肉瘤S180的抑制率可达86.5%。本研究初步观察了LAS对小鼠腹腔巨噬细胞(Peritonealmacrophages,PMΦ)的激活作用,以探讨其抑瘤作用机理。 1
2、 材料与方法 1.1 材料 昆明种小鼠,性别不限,18～22g,由山东省实验动物中心提供;雄性Balb/c小鼠,由山东医科大学提供。LAS为本室产品;RPMI1640培养基为GIBCO产品;3H-TdR由中国原子能研究所提供。 1.2 方法 1.2.1 PMΦ的体内激活及活性测定 1.2.1.1 PMΦ的体内激活与收集 小鼠腹腔注射LAS0.2ml后第3天无菌条件下取腹腔渗出细胞调整细胞浓度为1.0×106ml-1,分别向无菌24孔及96孔培养板内加入细胞悬液1.0、0.1ml,每样本均设3个复孔,并设空白对照孔,置37℃,
3、5%CO2培养箱内孵育2h，收集未粘附细胞并计数,培养板内为PMΦ单层。 1.2.1.2 PMΦ过氧化物酶活性的测定 参照文献［2］方法进行。 1.2.1.3 PMΦ吞噬功能的测定 参照文献［3］方法进行。 1.2.1.4 PMΦ细胞毒性测定 参照文献［4］方法进行。 1.2.2 PMΦIL-1的诱生及活性测定 参照文献［5］进行。12 2 结果 2.1 PMΦ的诱生 小鼠i.p.给LAS后,其PCs数及粘附细胞的比率均显著增加。PCs的诱生呈剂量依赖性关系,而粘附细胞的比率与LAS的剂量呈倒“U”型关系(P＜0.01;
4、P＜0.05，n=3)。 2.2 PMΦ过氧化物酶活性的测定 i.p.给药2d后,小鼠PMΦ过氧化物酶活性均显著增强,其中以40mg/kg为最佳。 2.3 PMΦ吞噬功能的测定 小鼠i.p.注射LAS2d后,PMΦ吞噬功能均得到显著提高,其中以40mg/kg剂量为最佳。 2.4 PMΦ细胞毒性测定 小鼠i.p.LAS2d后,LAS20～80mg/kg均可显著增强PMΦ细胞毒活性。 2.5 LAS诱导和促进IL-1产生 PMΦ在体外经不同浓度LAS作用48h,IL-1样活性物质的分泌明显增加,在15～120μg/ml浓度的范围
5、内IL-1的产生具有较好的剂量依赖性关系。 3 讨论 巨噬细胞为机体抗肿瘤和杀灭入侵病原微生物的效应细胞，小鼠给LAS后,PMΦ数量显著增加,且呈剂量依赖性关系,LAS在体内外均可激活PMΦ,并分泌一些细胞毒效应分子,如H2O2、IL-1;可提高PMΦ的过氧化物酶活性及吞噬功能，并使其细胞毒作用得到增强。综上所述,LAS对小鼠PMΦ具有较强的免疫调节作用,可能是其抑瘤的重要机制之一。■ ①国家九五科技攻关计划资助项目(96-C01-05-02)
