硫酸化茯苓多糖对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响.pdf

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1、第3O卷第1期安徽工程大学学报Vo1．30．No．12015年2月JournalofAnhuiPolytechnicUniversityFeh．，2015文章编号：1672—2477(2015)01—0001—05硫酸化茯苓多糖对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响高贵珍，孙冰清，吴超，刘小阳(宿州学院生物与食品212程学院，安徽宿州234000)摘要：研究硫酸化茯苓多糖(SP)对脂多糖(LPS)诱导的体内外小鼠巨噬细胞氧化损伤的影响．体外实验中，制备小鼠腹腔巨噬细胞，加入不同质量浓度(O～100mg／m

2、L)的SP和1mg／mL的LPS诱导剂，24h后检测细胞活力、一氧化氮(NO)、超氧阴离子自由基(O)及肿瘤坏死因子一(TNF—a)含量．体内实验中，42只ICR小鼠随机分为空白组、模型组和预防组，采用腹腔注射法连续给药7天后收集腹腔巨噬细胞，检测多种生化指标．实验结果表明：LPS可降低巨噬细胞的活性，增加0的释放和NO、TNF-a的分泌；SP能够显著降低NO的水平，提高巨噬细胞抗O)-的活力，对于TN卜a的含量没有显著影响．SP可有效地改善LPS对小鼠腹腔巨噬细胞的氧化损伤作用．关键词：硫酸化

3、茯苓多糖；脂多糖；巨噬细胞；氧化活性中图分类号：R285．5文献标识码：A茯苓是常用中草药，为真菌茯苓菌的菌核，茯苓菌寄生于松科植物赤松或马尾松等树根上，具有渗湿利尿、抗菌、抗凝血、抗肿瘤的作用，在一定程度上能够增强机体的免疫能力，并能延缓衰老，因此具有广阔的应用价值和发展前景．茯苓的主要化学成分为B一茯苓聚糖，生物活性低且溶解性差，为了更深入地研究茯苓的药理性质，可将天然茯苓多糖进行化学改造和修饰，即先切去茯苓聚糖分子主链上j3一(1—6)一支链得到茯苓多糖，再进行硫酸化修饰得到硫酸化茯苓多糖

4、(sulfationpachymaran，简称SP)，改造后的SP溶于水，在某些生物活性方面也有所增强．现代医学研究表明，茯苓多糖有明显的抗肿瘤、抗衰老及保肝脏作用_1]，但有关SP对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响鲜见报道．本实验利用LPS刺激巨噬细胞使其产生多种炎症细胞因子的特点]，诱导ICR小鼠体内外腹腔巨噬细胞，实施SP预防LPS对腹腔巨噬细胞的损伤．通过检测腹腔巨噬细胞活力、抗超氧阴离子自由基(o一2)活力单位及一氧化氮(N0)、肿瘤坏死因子一a(TNF—a)的含量，研究SP对小鼠腹腔巨噬细

5、胞功能的影响，为茯苓的全面开发和利用提供实验依据．1材料与方法1．1材料、试剂和仪器(1)材料．ICR小鼠，6～8周龄，购于徐州医学院动物部．(2)试剂．一氧化氮试剂盒(南京建成生物工程研究所)；小鼠肿瘤坏死因子a酶联免疫分析(ELISA)试剂盒、抗超氧阴离子自由基试剂盒(南京建成生物工程研究所)；10灭活小牛血清、DMEM培养基、内毒素脂多糖LPS(购于Sigma公司)；硫酸化茯苓多糖(合肥学院陈群教授提供)；中性红染液、萃取液(乙醇：水：醋酸一50：49：1)；0．49，6台盼蓝染色液、49

6、／6多聚甲醛磷酸缓冲液(PBS)(安徽环球药业股份有限公司等)．(3)仪器．扫描酶标仪(Multiskango1510，美国ThermoScientific)；倒置荧光显微镜(OlympusIX71，日本Olympus)；超低温冰箱(DW—HW138，中科美菱)；高速冷冻离心机(Neofuge23R，香港力康)；台式高速低温离心机(1—15PK，德国Sigma)；纯水机(Simplicity美国Millipore)、96孔板、培养瓶、手术器械等．1．2实验方法(1)体外实验．)／J鼠腹腔巨噬细胞

7、的制备．ICR小鼠(雌性)颈椎脱臼法处死，用75酒精浸泡2min，腹部中线剪开收稿日期：2014-12—1O基金项目：安徽省教育厅自然科学基金资助项目(KJ2013A242)作者简介：高贵珍(1962一)，女，安徽宿州人，教授，硕导．安徽工程大学学报第3O卷(1，10口墨～【uz3o050·200卜030搐100100CONLPSllO2O50100C0NIPSllO2050100LPS质量浓度为1mg／mL；预防组(sP+【鹈)，SP质量浓度分别为LPS质量浓度为1rag／mE；预防~[(SP

8、+LIX3)，s噘量浓度分别为Zmg／mL10mg／mL20mg／mL、50mg／mL、100mg／mL；1mg／mL、10mg／mL、20mg／mL、50rng／mL、100mg／mL；与空白组相比，P<0．05；与LPS组相比州’<0．o5，P